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Plasticidade, distribuição e dinâmica de ionócitos e cardiomiócitos: mecanismos fisiológicos de ajuste a contaminação ambiental em diferentes ambientes aquáticos

Processo: 21/02906-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de maio de 2021
Vigência (Término): 30 de abril de 2023
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Comparada
Pesquisador responsável:Marisa Narciso Fernandes
Beneficiário:Mariana Morozesk
Instituição-sede: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:19/08491-0 - Material particulado atmosférico e contaminação ambiental. Avaliação do impacto na biota aquática em uma abordagem ecofisiotoxicológica integrada, AP.TEM
Assunto(s):Ecofisiologia   Toxicologia   Brânquias   Rim   Miócitos cardíacos   Poluição ambiental   Ambiente aquático   Tilápia-do-Nilo   Robalo   Homeostase

Resumo

A ação do Material Particulado Atmosférico (MPA) oriundo de indústria siderúrgicas será avaliada em: (1) Tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus), uma espécie eurialina, de interesse comercial, cujos parâmetros fisiológicos e bioquímicos são bem conhecidos; (2) uma espécie topo-de-cadeia, o Robalo (Centropomus parallelus), indicadora dos efeitos reais no ambiente estuarino. Exemplares de cada espécie de peixe serão expostos a pelo menos 2 concentrações de MPA (grupos MPA) a serem determinadas e respectivos grupos controles (grupos C), mantidos em água sem adição de MPA. Após exposição tecidos com alta concentração de ionócitos (brânquias e rins) serão removidos e processados de acordo com a técnica a ser utilizada para a determinação das proteínas de transporte iônico (Na+ /K+ -ATPase, H-ATPase, cotransportador Na+ /K+ /2Cl- , canais de cloreto) por imunohistoquímica (Dang et al., 2000; McCormick et al., 2003) e será avaliada a distribuição dessas células em cada um dos órgãos analisados em microscópio de fluorescência e confocal. A plasticidade e dinâmica dos diferentes tipos de ionócitos será avaliado em relação ao ambiente e nível de contaminação. Em relação aos cardiomiócitos (coração), a ação do MPA será avaliada em relação a contratilidade miocárdica através da análise da expressão de proteínas envolvidas no acoplamento excitação-contração e manejo intracelular do Ca2+. A expressão das proteínas Ca2+ -APTase do retículo sarcoplasmático (SERCA), fosfolambano (PLB), trocador Na+ /Ca2+ (NCX) e canal de Ca2+ tipo L (LTCC) será analisada por Western blot. Após eletroforese das amostras de proteínas em gel de SDS-poliacrilamida seguida de transferência elétrica para uma membrana de fluoreto de polividileno (PVDF) e bloqueio das proteínas as membranas serão incubadas overnight a 4 oC com os anticorpos primários: anticorpo policlonal de coelho anti-SERCA (Abcam Plc, Cambridge, UK); anticorpo monoclonal de camundongo anti-PLB (Millipore Corporation, Billerica, MA); anticorpo monoclonal de coelho anti-NCX (Abcam Plc, Cambridge, UK); anticorpo monoclonal de camundongo anti-LTCC (Abcam Plc, Cambridge, UK) diluídos em uma solução de BSA 5% em um tampão TBS-T. Posteriormente, as membranas serão incubadas com os anticorpos secundários conjugados com fosfatase alcalina: anti-coellho IgG (Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA) e anti-camundongo IgG (Millipore Corporation, Billerica, MA). As membranas serão digitalizadas, as bandas serão analisadas por densitometria no software ImageJ e os resultados serão expressos em Unidades Arbitrárias (U.A.) de densidade óptica normalizadas pela quantidade de GADPH (Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA) detectado nas respectivas amostras. (AU)

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