Estabelecimento de um modelo tridimensional para determinação da eficácia e segurança farmacológica de derivados de nitrofuranos e indólicos e avaliação da infecção de Histoplasma capsulatum

Resumo

Histoplasma capsulatum é um fungo causador da Histoplasmose, uma Micose sistêmica e endêmica mundialmente. No Brasil, essa Micose afeta principalmente a região sudeste, causando graves problemas na saúde pública. Existe um número restrito de fármacos antifúngicos para o tratamento das Micoses em geral e, particularmente da Histoplasmose, que apresentam efeitos adversos significativos como toxicidade renal e hepática. Este fator, somado aos crescentes relatos de resistência antifúngica e à formação de biofilmes por esses fungos, faz com que seja emergente o desenvolvimento de novos antifúngicos mais eficazes tanto contra as células planctônicas quanto para os biofilmes e que tenham toxicidade reduzida. Sendo assim, este trabalho tem o objetivo de verificar a atividade anti-Histoplasma de derivados nitrofuranos e indólicos, bem como averiguar o(s) seu(s) possível(is) mecanismo(s) de ação. Além disso, pretende-se estabelecer um modelo tridimensional formado por células pulmonares para o estudo da interação H. capsulatum-hospedeiro aplicando metodologias moleculares e para avaliar a toxicidade dos compostos. Serão utilizadas duas cepas de H. capsulatum, EH-315 e a ATCC 26032 (G217-B). Os compostos derivados de nitrofuranos e indólicos foram elaborados e produzidos pelo grupo de pesquisa do Prof. Dr. Luigi Scipione da Universidade de Roma, na Itália. Os testes de sensibilidade serão conduzidos de acordo com o documento M27-A3, proposto pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2008), com pequenas modificações. Será realizada a Concentração Fungicida Mínima (CFM). Os compostos mais potentes serão submetidos ao teste de citotoxicidade em culturas tridimensionais e monocamada das linhagens A549 e MRC-5. Os compostos que obtiverem os melhores índices de seletividade, serão avaliados quanto à capacidade de inibir as células planctônicas na concentração de biofilme, biofilme inicial e biofilme maduro. Para isto, será quantificada as atividades metabólicas dos biofilmes (planctônica concentração de biofilme, iniciais e maduros) pelo método de redução do sal tetrazólico XTT e obtidas imagens de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), para verificarmos possíveis danos. Para determinar os mecanismos de ação serão realizadas: a quantificação do ergosterol da membrana, avalição do mecanismo de morte celular pelo ensaio de iodeto de propídio (PI) e Anexina (FITC), dosagem das espécies reativas de oxigênio (ROS), danos de parede e membrana celular por MEV, microscopia confocal e microscopia de transmissão. Além disto, a toxicidade será verificada em larvas de Caenorhabditis elegans, a teratogenicidade em embriões de Zebrafish e a mutagenicidade pelo teste de micronúcleo. (AU)