Progenitores miogênicos derivados de células tronco de pluripotência induzida (iPSC) cultivadas em matriz descelularizada de músculo esquelético equino

Resumo

Os equinos representam um modelo animal atraente para estudos de doenças que afetam o tecido musculoesquelético, exibindo muita similaridade com as lesões que ocorrem em seres humanos. A terapia celular e a Bioengenharia de Tecidos, especialmente com o uso de biomateriais naturais derivados de Matriz Extracelular Descelularizada (dMEC), têm sido amplamente utilizadas como alternativa terapêutica pela Medicina Regenerativa em doenças musculoesqueléticas. Assim, objetiva-se produzir um biomaterial acelular de músculo esquelético equino e avaliar a eficácia no suporte ao cultivo in vitro de células tronco de pluripotência induzida (iPSC) de origem equina. Amostras de bíceps femoral (1,5 x 1,5 cm) serão congeladas a -20°C durante 4 dias e incubadas em 1% SDS (7 dias), 5mM EDTA + 50 mM Tris (2 dias) e 1% Triton X-100 ( 2 dias); a eficácia da descelularização será avaliada pela ausência de células remanescentes (análise histológica), preservação das proteínas da matriz (imunofluorescência), organização da ultraestrutura da MEC (microscopia eletrônica de varredura) e quantificação do DNA remanescente (Picogreen). Os biomateriais gerados serão recelularizados com iPSC na concentração de 50.000 células/cm2 usando um sistema rotatório de cultivo celular em meio de diferenciação miogênica. Como controle, as iPSCs serão cultivadas sobre camadas de gelatina e matrigel. A presença das células no biomaterial será avaliada pela quantificação de núcleos (DAPI) e de DNA. Para confirmar a diferenciação de iPSCs para a linhagem miogênica, a análise da expressão gênica de progenitores miogênicos (PAX 3, Myo-D, miogenina, desmina e miosina) será realizada em três diferentes períodos da diferenciação in vitro. Assim, hipotetizamos que o biomaterial de dMEC produzido a partir do músculo esquelético equino poderia preservar o potencial de diferenciação miogênica, representando um biomaterial promissor para Medicina Regenerativa na terapia de doenças musculoesqueléticas. (AU)