Atividade funcional de células T modificadas com GXMR-CAR expressando a porção intracelular de CD28 ou CD137, no controle da criptococose experimental

Resumo

As infecções fúngicas invasivas (IFIs) apresentam maior taxa de morbidade e mortalidade dentre as doenças negligenciadas. Além disso, há um déficit de investimento no tratamento de IFIs comparado ao aporte para estudos sobre malária e tuberculose que possuem taxas de mortalidade parecidas às relatadas em IFIs. Nessa linha, o fungo Cryptococcus spp. é um dos principais causadores de IFIs, acometendo cerca de 1 milhão de indivíduos/ano e com taxas de mortalidade entre 20 a 70% em pacientes imunocomprometidos portadores do vírus HIV. De forma específica, C. gattii apresenta maior predileção pelo tecido pulmonar e é capaz de acometer indivíduos imunossuprimidos e imunocompetentes. Esse patógeno apresenta como fator de virulência um mecanismo de escape/subversão do sistema imunológico do hospedeiro, ao comprometerem a diferenciação e atuação dos perfis T helper (Th) do tipo 1 (Th1) e 17 (Th17) das células T CD4+ e dos perfis Tc1 e Tc17 de células T CD8. Para contornar esse processo, a atual proposta propõe redirecionar células T para o reconhecimento de C. gattii via interação com polissacarídeo-GXM presente na cápsula, por meio de receptores antigênicos quiméricos (CAR) que neste caso é caracterizado como GXMR-CAR. Nessa linha, a proposta atual propõe uma análise comparativa funcional de células T GXMR-CAR expressando a porção intracelular de CD28 (GXMR-CD28 CAR) ou CD137 (GXMR-CD137 CAR), no combate da infecção causada por C. gattii. O GXMR-CAR contém uma região espaçadora (hinge) e transmembrana oriunda da molécula CD8, e na região intracelular os motifs de ativação das moléculas CD28 ou CD137, em conjunto com motifs de CD3z, serão responsáveis pela ativação das células T após interação com C. gattii. Inicialmente, a linhagem celular Jurkat será modificada com GXMR-CD28 CAR ou GXMR-CD137 CAR, a partir da transdução lentiviral, para avaliar a integridade de expressão desses receptores e a capacidade de interação com C. gattii seguido pelo sinal de ativação celular. Em um segundo momento, a transdução de PBMC com GXMR-CD28 CAR ou GXMR-CD137 CAR permitirá quantificar a secreção de mediadores pró-inflamatórios e grânulos citotóxicos pelas células T modificadas e incubadas com o C. gattii. Além disso, a capacidade das células T modificadas em inibir o crescimento in vitro de C. gattii será investigado. Por fim, o efeito da infusão de células T modificadas com GXMR-CD28 CAR ou GXMR-CD137 CAR em camundongos NSG infectados com C. gattii será avaliado através da curva de sobrevida e carga fúngica pulmonar. (AU)