Atividade transcricional e pós-transcricional de timócitos que aderem a células mTEC mutantes no gene Aire

Resumo

O (a) bolsista estudará o perfil transcricional envolvendo mRNAs e miRNAs de timócitos que interagem fisicamente com células mTECs Aire wild-type (wt) ou Aire mutantes (adesão mTECs-timócitos em cultura in vitro). Como já discutido no projeto geral, a interação entre timócitos e as células tímicas epiteliais (TECs) é essencial para o desenvolvimento desses dois tipos celulares. Para testar essa hipótese, utilizaremos o sistema modelo de adesão mTECs-timócitos (co-cultura in vitro) para estudarmos seu efeito na modulação da expressão gênica. Como já vimos observando que esse tipo de adesão interfere com o transcriptoma das mTECs (Pezzi et al 2016), aventamos a possibilidade de que isso também poderá influenciar a atividade transcricional dos timócitos. Testaremos se mutações no gene Aire associadas com a síndrome APS1, mas induzidas pelo sistema CRISPR-Cas9 (mutações do gene Aire humano nos domínios SAND e PHD1) em mTECs, poderão influenciar a adesão e consequentemente a atividade transcricional dos timócitos. Uma vez com os dados de expressão provenientes de timócitos que aderiram a células mTEC Aire wt ou Aire mutantes, investigaremos as redes de interação entre essas duas espécies de RNA, ou seja, as interações miRNAs-mRNAs que em última análise controlam a expressão gênica a nível pós-transcricional. Os resultados serão úteis para avaliarmos se há associação entre mutações de Aire em mTECs com a atividade gênica de timócitos que aderem a essas células, o que também é importante para o estabelecimento da tolerância imunológica. (AU)