Prevenção da osteonecrose dos maxilares induzida por medicamentos com a utilização da terapia fotodinâmica. estudo experimental in vitro e in vivo

Resumo

Os bifosfonatos (BF's) são medicamentos antirreabsortivos empregados no tratamento de desordens esqueléticas, como a osteoporose, porém seu uso prolongado pode induzir a osteonecrose dos maxilares induzida por medicamentos (OMIM), e o tratamento desta condição representa um desafio para odontologia. O objetivo deste projeto será avaliar o efeito de terapias preventivas sobre a OMIM, durante o processo de reparo alveolar em ratos. Serão utilizados 360 ratos wistar, os quais serão tratados com 04 aplicações de 0,035 mg/kg de ácido zoledrônico (ZOE) por via caudal com intervalos de 15 dias entre as aplicações e posteriormente terão seus molares inferiores direitos removidos. Após a exodontia, os animais seguirão com o tratamento com ZOE no mesmo protocolo até a eutanásia. Os animais serão divididos em sete grupos (n=8) de acordo com o tratamento do alvéolo dental: GS (Sham - não será aplicado ZOE), GC (Coágulo), G² (²-tricálcio-fosfato), GD (gel de doxiciclina a 10%), GP (terapia foto-dinâmica), GD² (gel de doxiciclina a 10% + ²-tricálcio-fosfato), GP² (terapia foto-dinâmica + ²-tricálcio-fosfato), GPD (terapia foto-dinâmica +gel de doxiciclina a 10%), GPD² (terapia foto-dinâmica +gel de doxiciclina a 10% + ²-tricálcio-fosfato). Para análise in vitro por cultura de células primárias para determinação dos parâmetros biológicos serão utilizados 72 animais, e análises serão realizadas mediante: 1) Avaliação da Proliferação Celular; 2) Análise do Conteúdo de Proteínas Totais; 3) Análise de Expressão Gênica por RT-PCR em Tempo Real (Runx2, ²-catenina, osterix, fosfatase alcalina, osteocalcina, colágeno tipo I, rank, rankl, osteopontina e sialoproteína óssea); 4) Detecção e Quantificação da Mineralização Biológica; 5) Análise das Proteínas Ósseas por Imunofluorescência; 6) Análise da Formação de Osso Mineralizado Semelhante a Nódulos. Para análise in vivo, na etapa de cortes calcificados serão utilizados 72 animais, onde após 36 dias da data de exodontia, os animais serão eutanasiados para a avaliação através: 1) aplicação dos fluorocromos (calceína e alizarina) seguido da análise de microscopia confocal a laser e, 2) análise microtomográfica. Para análise in vivo, na etapa de cortes descalcificados serão utilizados 216 animais em que após 07, 14 e 38 dias da data de exodontia, os animais serão eutanasuados para avaliação através: 1) análises histometrica e histomorfométrica 2) imuno-histoquímica por meio da expressão das proteínas osteocalcina (OC), receptor ativador do fator nuclear kappa B ligante (RANKL), fosfatase ácido resistente ao tartarato (TRAP), 3) análise molecular RT-PCR com expressão gênica de osteoprotegerina (OPG), fosfatase alcalina (ALP), osteocalcina (OC), RANKL 4) análise por birrefringência com a coloração com picrosirius-Red. (AU)