Estudos sobre o efeito do nocaute e da superexpressão do componente RNA da telomerase (LeishTER) nos telômeros, no desenvolvimento e na sobrevida de Leishmania major

Resumo

As Leishmanioses são doenças infecciosas com alta mortalidade e taxa de incidência causadas por parasitos do gênero Leishmania, família Trypanosomatidae. A doença possui ampla distribuição geográfica e apresenta diferentes manifestações clínicas. A falta de prevenção e de tratamento eficientes classifica as Leishmanioses como doenças negligenciadas, exigindo urgentemente a descoberta de novos alvos terapêuticos. Os telômeros, terminais físicos dos cromossomos de eucariotos mantidos pela telomerase, são de grande interesse uma vez que eles cumprem papel fundamental na manutenção do genoma e na proliferação celular. A telomerase é uma ribonucleoproteina minimamente composta pelo componente TERT (Telomerase Reverse Transcriptase), uma proteína com função de transcriptase reversa e um lncRNA, o TER (Telomerase RNA), que contém a sequência do molde da repetição telomérica copiado pela TERT durante a replicação dos telômeros. Estudos recentes mostram que o TER possui outras funções além de ser apenas um molde para elongamento dos telômeros. Sua estrutura secundária possui domínios com funções de controle da inserção de nucleotídeos pelo TERT, reconhecimento da sequência e ligação de proteínas acessórias. Recentemente foi identificado e parcialmente caracterizado o componente TER da telomerase de Leishmania (LeishTER), mas nada se conhece sobre sua biogênese e suas funções. Dessa forma este trabalho visa estudar e entender melhor o papel do LeishTER na proliferação e sobrevivência de Leishmania sp. utilizando parasitos superexpressores de LeishTER e parasitos nocaute para LeishTER, obtidos usando o sistema CRISPR-Cas9 desenvolvido por Beneke et al. (2017). Caso bem-sucedido, iremos verificar se a superexpressão ou perda do componente TER afeta a ação da telomerase na manutenção do comprimento dos telômeros, a metaciclogênese e a capacidade de infectividade do parasito. Também será analisada a função de LeishTER em parasitos superexpressando a PINX1, um inibidor natural da telomerase, que interage com o TERT sequestrando o mesmo do complexo ribonucleoproteico telomerase. Diferente do componente TERT, os componentes TER dos eucariotos, apesar de apresentarem certo grau de conservação em sua estrutura secundária e em suas funções primárias, são moléculas organismo-específicas. Desta forma, eles podem ser considerados alvos em potencial para o desenvolvimento de terapias específicas contra os parasitos. (AU)