Comparação do tropismo e patogenicidade da variante gama versus SARS Cov-2 original em camundongos K18-ACE2 humanizado: papel da microbiota intestinal

Resumo

Sintomas gastrointestinais durante a COVID-19 têm sido associados a um pior prognóstico. A infecção pela variante P.1 apresenta maior taxa de mortalidade comparado à infecção causada pelo vírus ancestral. Entretanto, a influência dos distúrbios gastrointestinais, como a disbiose da microbiota intestinal na fisiopatogênese da COVID-19, principalmente com relação a variante P.1 permanece desconhecida. O objetivo deste trabalho será comparar os efeitos na composição da microbiota intestinal durante infecção pela variante gama (P.1.) versus à infecção por SARS CoV-2 ancestral (B.1), além de verificar os efeitos da modulação da microbiota intestinal via ingestão de inulina ou butirato no perfil de resposta imunológica durante infecção por SARS CoV-2. Camundongos K18-hACE2 serão infectados com SARS CoV-2 ancestral (B.1) ou com a variante P.1, avaliados clinicamente por 5 dias, e então eutanasiados para coleta dos materiais biológicos ou mantidos por 10 dias para análise de taxa de sobrevivência. A carga viral será mensurada por qRT-PCR no pulmão, coração, duodeno, cólon, baço e sangue total. Parâmetros inflamatórios serão verificados por quantificação por ELISA das citocinas TNF-±, IL-6, IL-1², IL-17, CXCL1 (KC), CXCL-2 e IFN-². Além disso, transcritos de vias de apoptose ( BCL-2 e BAX), de resposta anti-viral (IFN-³, IFN-², IFN-», OAS1 e ISG15) e inflamatória (CXCL11, CXCL10, TNF-±, IL-6, IL-1², IL-17, IL-22, RANK-1) serão avaliados por qRT-PCR no pulmão e em células epiteliais intestinais isoladas. Para análise da composição da microbiota será realizado sequenciamento do RNA ribossômico 16S do conteúdo luminal colônico. Todos os parâmetros avaliados serão repetidos em modelos experimentais de depleção da microbiota por uso de antibióticos na água de beber, além de modelos de tratamento com dieta suplementada com 5% de inulina ou tratamento via ingestão hídrica com 150 mM de butirato. Desta forma, o trabalho busca contribuir com informações sobre a patogênese da infecção causada pela variante P.1 principalmente com relação as questões intestinais e de microbiota, visto a importância destes na gravidade da doença. (AU)