Ação das proteínas LMP1 e RPMS1 do vírus de Epstein-Barr (EBV) na regulação de genes codificadores de proteínas de checkpoint imunológico em células humanas cultivadas in vitro

Resumo

Baseado em dados da Organização Mundial de Saúde (OMS), em todo mundo são estimados 2 milhões de novos casos de cânceres relacionados a infecções por microrganismos. A maior parcela da população mundial adulta apresenta infecção latente pelo vírus de Epstein-Barr (EBV), reconhecida como potencialmente cancerígena para humanos. Esse vírus é encontrado nas células neoplásicas de virtualmente todos os casos da forma endêmica africana do linfoma de Burkitt e do carcinoma indiferenciado de nasofaringe. Adicionalmente, a infecção pelo EBV também está associada ao desenvolvimento de parcela de outros cânceres, especialmente linfomas. A fase latente do ciclo biológico do EBV é caracterizada por restrição na expressão de alguns produtos virais, o que favorece sua imunoevasão e infecção persistente no hospedeiro. Por outro lado, a expressão de alguns genes do EBV durante o ciclo latente viral pode efetuar regulação de checkpoints imunológicos, indicando que o EBV também pode beneficiar a carcinogênese por esse mecanismo. Há alguns indícios de ação da oncoproteína viral LMP1 na expressão de PD-L1 e CTLA-4, mas pouco se sabe sobre sua eventual atividade na expressão de outras moléculas importantes para regulação da ação de linfócitos e seus potenciais efeitos para a linfomagênese associada ao EBV. Adicionalmente, são escassos os dados sobre outros produtos virais do EBV na regulação de checkpoints imunológicos, incluindo a proteína viral RPMS1. Assim, este estudo pretende avaliar os efeitos da expressão das proteínas LMP1 e RPMS1 do EBV na regulação de moléculas com atividade de checkpoints imunológicos empregando linhagens de células neoplásicas derivadas de linfomas EBV-positivos, bem como verificar eventuais reflexos dessa regulação no fenótipo das células cultivadas in vitro. O perfil de expressão de moléculas selecionadas de checkpoints imunológicos será inicialmente avaliado nas linhagens celulares por meio de qPCR. Subsequentemente, será efetuada inibição da expressão de EBV LMP1 e RPMS1 por meio de tecnologia de RNA de interferência (RNAi) para avaliação dos possíveis efeitos em relação à expressão das moléculas de checkpoint imunológico investigadas. Por fim, linhagens com e sem inibição das eventuais moléculas reguladas pela expressão de LMP1 e RPMS1 serão avaliadas quanto a viabilidade celular, citotoxicidade, apoptose e invasão celular in vitro. Ao final dos experimentos espera-se que os dados obtidos possam elucidar a ação de LMP1 e RPMS1 na regulação de moléculas de checkpoints imunológicos, bem como a atuação destas moléculas no fenótipo celular in vitro, propiciando melhor entendimento sobre as propriedades oncogênicas do EBV. (AU)