Papel do PPAR gamma na inflamção e no transporte de glicose em células Caco-2

Resumo

O câncer colorretal compromete o intestino grosso e o reto. Aproximadamente 20% dos pacientes com doença inflamatória intestinal (DII) desenvolvem câncer de cólon e essa população apresenta um aumento de duas vezes na mortalidade. A DII é uma condição inflamatória crônica do epitélio gastrintestinal devido a alterações na reatividade do sistema imunológico. Nos tumores associados à colite colorretal e na DII, há uma ruptura nas respostas pró e anti-inflamatórias e a mucosa intestinal secreta altas concentrações de citocinas pró-inflamatórias. As citocinas inflamatórias podem regular o metabolismo de carboidratos.O receptor ativado por proliferador de peroxissoma gama (PPAR³) é um receptor nuclear altamente expresso em células epiteliais diferenciadas do cólon, inclusive na linhagem Caco-2, que controla a expressão de grande número de genes reguladores na homeostase e inflamação da glicose.Portanto, o objetivo deste estudo é caracterizar os efeitos do PPAR³ na inflamação e no metabolismo da glicose da linhagem Caco-2. Para isso, células Caco-2 epiteliais humanas serão incubadas com sulfato de sódio a 2% dextrano (DSS) e as células serão tratadas com agonista de PPAR³ (pioglitazona 50 e 300µM) e antagonistas de PPAR³ (GW9662 5 e 10µM).Os métodos a serem utilizados são: resistência elétrica trans-epitelial para determinar a permeabilidade celular; ensaio de transporte de glicose para verificar a passagem através da monocamada epitelial; ELISA multiplex para medir mudanças no conteúdo protéico de transportadores de glicose e marcadores inflamatórios; PCR em tempo real para analisar mudanças na expressão gênica de transportadores de glicose e marcadores inflamatórios; citometria de fluxo para compreender quaisquer efeitos adicionais do PPAR³ na apoptose e nos checkpoints do ciclo celular.