Avaliação da heterogeneidade do genoma mitocondrial no carcinoma renal de células claras.

Resumo

Avaliação da heterogeneidade do genoma mitocondrial no carcinoma renal de células claras.Introdução: O carcinoma de células renais (CCR) é o tumor renal maligno mais frequente diagnosticado nos adultos. Uma série de defeitos genéticos tem sido observada nos tumores renais, tais achados podem estar envolvidos na gênese ou progressão destas neoplasias. Alterações genéticas da mitocôndria e defeitos metabólicos são fatores que contribuem para o desenvolvimento de muitas doenças humanas, incluindo o câncer. Estas alterações genéticas podem estar relacionadas desde a gênese desta neoplasia até a agressividade tumoral. Dentre as alterações genéticas, destacam-se as deleções e translocações do braço curto do cromossomo 3 e as alterações do genoma mitocondrial (redução no número de cópias; presença de polimorfismos e inserções, deleções e mutações). Objetivo: avaliar a heterogeneidade do genoma mitocondrial no tecido tumoral de pacientes portadores de CCR-células claras. Métodos: Serão obtidas amostras de CCR-células claras e do parênquima renal sem acometimento tumoral de quinze pacientes. De cada paciente, após a nefrectomia, serão retiradas quatro amostras de diferentes regiões da lesão tumoral. Após a microdissecção das amostras realizaremos a extração do DNA de forma a obter apenas o DNA mitocondrial (mtDNA) íntegro sem a contaminação pelo DNA nuclear, nesta técnica de extração ocorre primeiramente o isolamento da fração mitocondrial e em seguida a extração do mtDNA. O sequenciamento do mtDNA será realizado no Ion PGM (New Generation Sequencing); A avaliação da ocorrência de depleção do DNA mitocondrial será realizada através da determinação de número de cópias por Droplet Digital PCR (ddPCR). A avaliação da heterogeneidade intra-tumoral será analisada confrontando-se os achados genéticos encontrados em cada um dos fragmentos do mesmo tumor. Trata-se do primeiro que avaliará a heterogeneidade do mtDNA no CCR-células claras. Este achado contribuirá para a elucidação das alterações metabólicas que ocorrem nas diferentes áreas tumorais de um mesmo paciente