Expressão e caracterização da enzima glucocerebrosidase em linhagens de p. pastoris com padrões distintos de glicosilação

Resumo

A produção de proteínas recombinantes é uma abordagem cada vez mais utilizada para fins comerciais e farmacêuticos. Dentre os sistemas heterólogos utilizados, a levedura Pichia pastoris é uma das plataformas mais exploradas na biotecnologia pelas características de sua produção em alta densidade e grande produtividade apresentando vantagens para sua escolha nesse processo. No caso da doença de depósito alvo desta pesquisa, denominada doença de Gaucher, a ausência ou deficiência da enzima glucocerebrosidase (GCase) causa o acúmulo de glucocerebrosídio formando as células de Gaucher, responsáveis pelos sintomas da doença. O tratamento é feito através da reposição enzimática dessa enzima, principalmente produzida de maneira heteróloga em células de ovário de hamster chinês (CHO) e distribuída pelo SUS, sendo esse medicamento importado, caracterizando um grande gasto para a saúde pública. Desta maneira, o objetivo deste projeto é a produção da enzima GCase na levedura P. pastoris, com a utilização de vetores de expressão para produção da enzima GCase para a transformação da levedura selvagem comercial, e para a transformação da linhagem P. pastoris GlycoSwitch para posterior expressão, purificação e comparação da proteína GCase expressa nestes dois sistemas de hospedeiro. A P. pastoris selvagem comercial deverá resultar numa GCase hipermanosilada enquanto que o uso da linhagem P. pastoris GlycoSwitch deverá resultar na produção de uma GCase com um padrão de glicosilação semelhante ao do produto comercial Cerezyme (Genzyme, da empresa Sanofi-Pasteur).