Construção de plasmados otimizados CRISPR-Cas9 para a dissecção da via PI3K/AKT/Foxo pathway in Aedes aegypti

Resumo

CRISPR-Cas9 é a ferramenta de edição de genomas mais precisa atualmente utilizada para o nocaute de genes específicos. Nosso colaborador e coordenador do VigLab, Imperial College London, Professor George Christophides, vem exercendo um papel de liderança no desenvolvimento de plasmídeos baseadas em CRISPR-Cas9. Estes plasmídeos promovem a expressão de Cas9 e sgRNAs e consequente levam ao nocaute de genes alvos de interesse. O Vigilab é atualmente financiado pela Fundação Bill e Melinda Gates para aplicar essa ferramenta no desenvolvimento de mosquitos transgênicos refratários ao Plasmodium, o parasita da malária. No presente projeto, utilizaremos a metodologia desenvolvida pelo Prof. Christophides para gerar plasmídeos otimizados para o nocaute importantes componentes da via PI3K/AKT/Foxo. Em nosso laboratório, identificamos esta via como um regulator chave da homeostasia intestinal. Esta via controla a expressão de genes relacionados a processos REDOX e antivirais, e modula a microbiota intestinal do vetor. O estudante também será treinado em importantes técnicas utilizadas pelo Vigilab para avaliar o envolvimento de bactérias no controle da homeostasia intestinal do mosquito. Nosso grupo já possui uma sólida parceria com o Prof. Christophides e este projeto será instrumental para aprimorar as técnicas atualmente utilizadas em Botucatu para o desenvolvimento de mosquitos mutantes por CRISPR-Cas9. (AU)