Caracterização de mutantes fosfomiméticos de quinases em Aspergillus fumigatus usando edição gênica por CRISPR-cas9

Resumo

O Aspergillus fumigatus é um fungo patogênico oportunista e alergênico, responsável por cerca de 65% das infecções fúngicas em humanos e por diversas patologias em indivíduos imunocomprometidos, incluindo a aspergilose invasiva (AI). A. fumigatus possui quatro MAPKs descritas: MpkA (reguladora central da via de sinalização do CWI, atuando também na resposta ao estresse oxidativo); MpkB (ainda pouco caracterizada) e MpkC e SakA (ortólogos de S. cerevisiae-Hog1, uma quinase envolvida com o controle da via da resposta de "High-Osmolarity glicerol - HOG). Estudos atuais estão interessados no entendimento do papel das MAPKs na sinalização celular desencadeada pelo tratamento com moléculas indutoras de estresse, como sorbitol ou vermelho congo (congo red) e caspofungina. Recentemente foi demonstrado o envolvimento de Hog1 ortólogo: SakA e MpkC, na resposta a diferentes estresses celulares como estresse oxidativo e osmótico, e na adaptação de fungos à caspofungina. Além disso, MpkA tem sido relacionada com a resposta do patógeno ao estresse da caspofungina. As novas estratégias de edição de genes para a obtenção de mutantes fosfo-miméticos, como CRISPR-cas 9, por exemplo, são ferramentas importantes para o estudo de elementos de vias de sinalização moduladas pela fosforilação durante um estresse sofrido pelo organismo. Desta forma, este projeto BEPE tem como principal objetivo compreender a sinalização celular mediada pela fosforilação de proteínas envolvendo as vias de MAPKs, como SakA e MpkC, de A. fumigatus.