Caracterização fenotípica e molecular da Bulkholderia mallei em eqüídeos com mormo

Resumo

Mormo é uma enfermidade causada pela Burkholderia mallei, bactéria Gram negativa, que acomete os equídeos desencadeando doença de caráter crônico ou agudo podendo atingir o homem, os carnívoros e eventualmente pequenos ruminantes. É uma doença de notificação obrigatória no mundo, e é grande causadora de morbidade e mortalidade em equinos. Atualmente, o mormo é endêmico em países como Brasil, Oriente Médio, Ásia e África. Os equinos quando apresentam sintomas os mesmos são: febre alta, depressão, corrimento nasal, tosse, lesões nodulares que evoluem para úlceras assumindo forma estrelada após cicatrização, que ocorrem com maior frequência na fase crônica da doença. O objetivo do trabalho é realizar a identificação fenotípica e molecular da B. mallei em órgãos (pulmão, linfonodos, baço, fígado e rim) de animais soropositivos para mormo (Fixação de Complemento), padronização da PCR em tempo real (qPCR) , e correlacionar a PCR com a qPCR além de realizar o sequenciamento genético das bactérias nas diferentes amostras. O perfil das lesões macroscópicas e microscópicas será avaliado como diagnóstico complementar bateriológico e molecular das cepas de B. mallei circulantes. Serão coletadas 50 amostras de equídeos com diagnóstico sorológico positivo de mormo, estando 35 equinos alojados na estação quarentenária de Cananéia/SP, e os demais em focos da doença sob interdição sanitária da Coordenadoria de Defesa Agropecuária do Estado de São Paulo. Os animais serão necropsiados e os órgãos submetidos às análises macroscópica e histopatológica (coloração hematoxilina e eosina). Serão realizados testes microbiológicos das amostras de tecidos em ágar batata e Mueller Hinton, acrescido de glicerol, sangue de carneiro e com ou sem penicilina, objetivando o crescimento e identificação de colônias de B. mallei, por testes bioquímicos. Será realizada a PCR das colônias e órgãos para detecção do gene Flic da B. mallei, qPCR e posteriormente sequenciamento genético do gene Flip. Os métodos de identificação direta do agente (isolamento bacteriano, PCR e qPCR) visam ser incorporados ao diagnóstico laboratorial do Instituto Biológico e dessa forma auxiliar nas medidas sanitárias, epidemiológicas e controle da doença pelos órgãos de defesa sanitária animal do Brasil. (AU)