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Ação de DNase produzida por Paracoccidioides Brasiliensis sobre NETs (neutrophil extracellular traps) liberadas por neutrófilos humanos em resposta ao fungo

Processo: 17/26230-3
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de abril de 2018
Vigência (Término): 29 de fevereiro de 2020
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Pesquisador responsável:Luciane Alarcão Dias-Melicio
Beneficiário:Yohan Ricci Zonta
Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Assunto(s):Paracoccidioidomicose   Imunopatologia   Neutrófilos
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:DNAse | NETs (neutrophil extracellular traps) | neutrófilos | paracoccidioidomicose | Imunopatologia

Resumo

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica considerada endêmica na América Latina. Seus agentes etiológicos, fungos do complexo Paracoccidioides, podem ser classificados como fungos dimórficos, possuindo, assim como outros membros de sua família, habitat geográfico restrito, conídios como forma infectante e as mesmas características termo-dimórficas. A infecção acontece pela inalação dos conídios infectantes, levando a uma resposta imunológica grave nos pulmões, com formação de lesões granulomatosas e dependendo da forma clínica, disseminação para outros órgãos. Os neutrófilos, células da imunidade inata, são responsáveis por uma resposta de defesa importante, liberando redes que são chamadas de NETs (Neutrophil Extracellular Traps), e que possuem a capacidade de envolver e destruir as leveduras do fungo. Entretanto, já foi identificado que alguns fungos são capazes de produzir DNAse como um mecanismo de escape dessas redes. Como já foi identificado em trabalhos anteriores, diferentes padrões de NETs, quando neutrófilos humanos foram desafiados com diferentes cepas de Paracoccidioides brasiliensis, gostaríamos de avaliar se essa diferenciação na conformação das NETs estaria relacionada com a capacidade dessas cepas em produzirem DNAse, ou uma proteína "like", com atividade semelhante à DNAse, e que teria capacidade de degradar as NETs para garantir a sobrevivência do fungo. Dessa forma, o objetivo geral deste trabalho será identificar nas culturas de neutrófilos humanos desafiados com as cepas Pb18 (virulenta) e Pb265 (avirulenta), a produção, liberação e os diferentes padrões de NETs em resposta às diferentes cepas do fungo, correlacionando com a capacidade dessas cepas em produzirem DNAse nessas culturas. Para isso, neutrófilos de sangue periférico de 15 indivíduos saudáveis serão isolados e desafiados in vitro com ambas as cepas do fungo, cultivados e replicados em nosso laboratório. A produção, liberação e conformação de NETs em resposta ao fungo serão avaliadas por Microscopia Confocal, de Varredura, e por técnica de High Content, e a quantificação de NETS será realizada utilizando o kit fluorimétrico Quant-iT PicoGreen. A quantificação da expressão de RNA do gene codificante da DNAse fúngica será realizada por RT-PCR. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ZONTA, YOHAN RICCI; DEZEN, ANA LAURA ORTEGA; DELLA COLETTA, AMANDA MANOEL; YU, KAIO SHU TSYR; CARVALHO, LARISSA; SANTOS, LEANDRO ALVES DOS; DEPRA, IGOR DE CARVALHO; KRATOFIL, RACHEL M.; WILLSON, MICHELLE ELIZABETH; ZBYTNUIK, LORI; et al. Paracoccidioides brasiliensis Releases a DNase-Like Protein That Degrades NETs and Allows for Fungal Escape. FRONTIERS IN CELLULAR AND INFECTION MICROBIOLOGY, v. 10, . (18/09706-7, 17/26230-3)
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
ZONTA, Yohan Ricci. Ação de DNAse produzida por Paracoccidioides brasiliensis sobre NETs (Neutrophil Extracellular Traps) liberadas por neutrófilos humanos em resposta ao fungo. 2020. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Medicina. Botucatu Botucatu.

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