Produção de três estirpes mutantes de Francisella noatunensis orientalis através da deleção dos genes de virulência igl e pdp

Resumo

O objetivo final do projeto PIPE a qual este projeto de TT-3 está vinculado é produzir uma vacina viva atenuada contra Francisella noatunensis subespécie orientalis que possa ser utilizada nas pisciculturas para controle e prevenção da infecção causada por este agente. Neste sentido, o objetivo da 1ª Fase do projeto é produzir três estirpes mutantes de Francisella noatunensis orientalis, a partir de uma estirpe brasileira não mutante isolada no laboratório da PREVET (36163D). A proposta é deletar os genes de virulência igl e pdp, pertencentes a ilha de patogenicidade de Francisella, produzindo-se assim três estirpes: Estirpe 1: deleção do gene igl; Estirpe 2: deleção do gene pdp; Estirpe 3: deleção dupla dos genes igl e pdp. Assim sendo, espera-se que as estirpes mutantes possam ser usadas para a elaboração de uma vacina viva atenuada, ainda não existente no mercado. Inicialmente, será realizado sequenciamento total e anotação do genoma da estirpe brasileira não mutante isolada no laboratório da PREVET (36163D), com o intuito de identificar os conjuntos de genes dos "operons" igl e pdp, que serão deletados para produção das estirpes mutantes propostas. Em seguida, será realizada a deleção dos genes utilizando a estirpe brasileira (36163D), pela técnica "Lambda red", para criação das estirpes mutantes citadas anteriormente. A mutação das estirpes da bactéria produzidas será verificada pela técnica de PCR e sequenciamento total e análise dos genomas dos mutantes. Todas as etapas de sequenciamento descritas serão realizadas em laboratórios pertencentes ao Departamento de Tecnologia da FCAV, UNESP, Câmpus de Jaboticabal. A geração das estirpes mutantes será realizada no laboratório da empresa PREVET. (AU)