Explorando as propriedades biofísicas da proteína humana de organização e compactação do Golgi (GRASP55) e suas interações com modelos de membrana

Resumo

Proteínas de Organização e Compactação do Golgi (GRASP) desempenham papel fundamental em uma variedade de funções incluindo a formação da estrutura em fitas do aparato de Golgi e a secreção não-convencional de proteínas. O mecanismo molecular responsável pelas propriedades funcionais de GRASPs permance não entendido. Nosso projeto se foca principalmente na investigação de características bioquímicas e biofísicas da GRASP humana, GRASP55, em solução e de suas interações com modelos de membrana. Embora várias estruturas cristalográficas de domínios GRASP estejam disponíveis, ainda há uma carência de dados acerca da correlação entre estrutura e função da proteína. No presente projeto, pretendemos nos ater a dois aspectos básicos do mecanismo funcional de GRASP55: (1) embora GRASP55 esteja envolvida em várias funções, o conhecimento detalhado sobre estrutura, tamanho, oligomerização e comportamento intrinsicamente desornado (IDP) não são ainda conhecidos; (2) GRASPs estão envolvidas em tethering de membranas, mas não há relatos até o momento de detalhes moleculares sobre a interação de GRASP com membranas do Golgi. Para alcançar tais objetivos, nos propomos a usar uma combinação de métodos bioquímicos e biofísicos, como ensaios de proteólise, dicroísmo circular, fluorescência, espalhamento de raios X a baixos ângulos, calorimetria diferencial de varredura, NMR em solução, ressonância do spin eletrônico e calorimetria de titulação isotérmica. Antevemos que resultados de nossos experimentos contribuam com o presente entendimento dos aspectos estruturais de GRASP55 e suas interações com modelos de membrana, que são cruciais para sua função.