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Aplicação de CRISPR-interferência na elucidação da patogênese da leptospirose e desenvolvimento de novas estratégias para obtenção de mutantes knockout

Processo: 17/06731-8
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de julho de 2017
Vigência (Término): 31 de outubro de 2022
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
Beneficiário:Luis Guilherme Virgílio Fernandes
Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:19/17488-2 - Avançando no entendimento da patogenicidade e virulência da Leptospira interrogans através de análises proteômicas, estruturais, mutagênicas e imunológicas, AP.TEM
Bolsa(s) vinculada(s):19/20302-8 - Silenciamento de RNA não-codificador (ncRNA) mediado por interferência CRISPR (CRISPRi) em cepas saprofíticas e patogênicas de Leptospira, BE.EP.PD
Assunto(s):Leptospirose   Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas   Proteína 9 associada à CRISPR   Inativação gênica   Leptospira
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:CRISPR interferência | knock-out | Leptospira | leptospirose | mutante | silenciamento genico | Criação de Mutantes

Resumo

A leptospirose é uma zoonose de importância global recentemente incluída na lista das Doenças Tropicais Negligenciadas. Em áreas urbanas, os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença por permitirem a colonização das leptospiras nos túbulos renais proximais e as excretarem vivas na urina. Segundo a Organização Mundial da Saúde, o número de casos clínicos anuais no mundo permanece subestimado. O melhor entendimento da patogênese da bactéria é um ponto crucial para o desenvolvimento de uma vacina eficaz. A geração de mutantes de Leptospira é uma peça chave na elucidação de fatores de virulência e da biologia básica da bactéria. Durante o desenvolvimento do Projeto de Pós-Doutorado (2017/06731-8 e BEPE 2019/20302-8), foi desenvolvida a ferramenta de CRISPR-interferência para silenciamento gênico epissomal e completo em estirpes saprofíticas e patogênicas, sendo que pela primeira vez na literatura espécies além de L. interrogans foram manipuladas. O sistema de CRISPRi desenvolvido requer a síntese constitutiva de uma proteína dCas9 ("dead" Cas9) e de um RNA guia (sgRNA), o qual direciona a proteína para os alvos de interesse, bloqueando a transcrição. Esta ferramenta tem se mostrado extremamente útil na elucidação in vitro e in vivo do papel de proteínas de Leptospira spp.. Neste contexto, nosso grupo apresenta inúmeros genes potenciais para silenciamento por esta técnica, sendo que com este período adicional, pretende-se aplicar e difundir a técnica de CRISPRi em nosso laboratório, bem como explorar estes alvos potenciais. Também pretende-se desenvolver novos plasmídeos para knockout genético, por meio da utilização da enzima Cas9 e co-expressão com proteínas de Mycobacterium tuberculosis que atuam no reparo da quebra genômica induzida pela enzima.

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Publicações científicas (19)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
TEIXEIRA, ALINE F.; FERNANDES, LUIS G. V.; SOUZA FILHO, ANTONIO; SOUZA, GISELE O.; VASCONCELLOS, SILVIO A.; HEINEMANN, MARCOS B.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. Evaluation of Lsa46 and Lsa77 Leptospiral Proteins for Their Immunoprotective Activities in Hamster Model of Leptospirosis. BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL, v. 2018, p. 13-pg., . (14/50981-0, 16/11541-0, 17/06731-8)
NASCIMENTO FILHO, EDSON G.; VIEIRA, MONICA L.; TEIXEIR, ALINE F.; SANTOS, JADEMILSON C.; FERNANDES, LUIS G. V.; PASSALIA, FELIPE J.; DAROZ, BRENDA B.; ROSSINI, AMANDA; KOCHI, LEANDRO T.; CAVENAGUE, MARIA F.; et al. Proteomics as a tool to understand Leptospira physiology and virulence: Recent advances, challenges and clinical implications. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 180, p. 8-pg., . (14/50981-0, 17/01411-5, 17/01102-2, 16/01384-5, 16/04295-3, 16/11541-0, 17/06731-8)
CAVENAGUE, MARIA F. F.; TEIXEIRA, ALINE F. F.; FERNANDES, LUIS G. V.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. LIC12254 Is a Leptospiral Protein That Interacts with Integrins via the RGD Motif. TROPICAL MEDICINE AND INFECTIOUS DISEASE, v. 8, n. 5, p. 15-pg., . (18/08131-0, 19/17488-2, 16/11541-0, 17/06731-8)
FERNANDES, L. G., V; HORNSBY, R. L.; NASCIMENTO, A. L. T. O.; NALLY, J. E.. Application of CRISPR Interference (CRISPRi) for Gene Silencing in Pathogenic Species of Leptospira. JOVE-JOURNAL OF VISUALIZED EXPERIMENTS, v. N/A, n. 174, p. 14-pg., . (17/06731-8, 14/50981-0, 19/20302-8)
STONE, NATHAN E.; HALL, CARINA M.; ORTIZ, MARIELISA; HUTTON, SHELBY M.; SANTANA-PROPPER, ELLA; CELONA, KIMBERLY R.; WILLIAMSON, CHARLES H. D.; BRATSCH, NICOLE; FERNANDES, LUIS G. V.; BUSCH, JOSEPH D.; et al. Diverse lineages of pathogenic Leptospira species are widespread in the environment in Puerto Rico, USA. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 16, n. 5, p. 27-pg., . (19/20302-8, 17/06731-8)
DAROZ, BRENDA BEVILAQUA; VIRGILIO FERNANDES, LUIS GUILHERME; TEIXEIRA, ALINE FLORENCIO; TABET OLLER NASCIMENTO, ANA LUCIA. In Silico Structural and Functional Characterization of HtrA Proteins of Leptospira spp.: Possible Implications in Pathogenesis. TROPICAL MEDICINE AND INFECTIOUS DISEASE, v. 5, n. 4, . (18/21959-8, 17/06731-8, 16/11541-0, 14/50981-0)
KOCHI, LEANDRO TOSHIO; FERNANDES, LUIS GUILHERME VIRGILIO; NASCIMENTO, ANA LUCIA TABET OLLER. Heterologous Expression of the Pathogen-Specific LIC11711 Gene in the Saprophyte L. biflexa Increases Bacterial Binding to Laminin and Plasminogen. PATHOGENS, v. 9, n. 8, . (18/09652-4, 17/06731-8, 14/50981-0)
TEIXEIRA, ALINE F.; FERNANDES, V, LUIS G.; CAVENAGUE, MARIA F.; TAKAHASHI, MARIA B.; SANTOS, JADEMILSON C.; PASSALIA, FELIPE J.; DAROZ, BRENDA B.; KOCHI, LEANDRO T.; VIEIRA, MONICA L.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. Adjuvanted leptospiral vaccines: Challenges and future development of new leptospirosis vaccines. Vaccine, v. 37, n. 30, p. 3961-3973, . (17/01411-5, 17/06731-8, 17/25167-6, 14/50981-0, 17/01102-2, 16/11541-0, 17/26223-7, 17/00236-5, 16/01384-5)
FERNANDES, L. G. V.; HORNSBY, R. L.; NASCIMENTO, A. L. T. O.; NALLY, J. E.. Genetic manipulation of pathogenic Leptospira: CRISPR interference (CRISPRi)-mediated gene silencing and rapid mutant recovery at 37 degrees C. SCIENTIFIC REPORTS, v. 11, n. 1, . (14/50981-0, 17/06731-8, 19/20302-8)
TEIXEIRA, ALINE F.; FERNANDES, LUIS G. V.; SOUZA FILHO, ANTONIO; SOUZA, GISELE O.; VASCONCELLOS, SILVIO A.; HEINEMANN, MARCOS B.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. Evaluation of Lsa46 and Lsa77 Leptospiral Proteins for Their Immunoprotective Activities in Hamster Model of Leptospirosis. BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL, . (16/11541-0, 14/50981-0, 17/06731-8)
NASCIMENTO FILHO, EDSON G.; VIEIRA, MONICA L.; TEIXEIR, ALINE F.; SANTOS, JADEMILSON C.; FERNANDES, LUIS G. V.; PASSALIA, FELIPE J.; DAROZ, BRENDA B.; ROSSINI, AMANDA; KOCHI, LEANDRO T.; CAVENAGUE, MARIA F.; et al. Proteomics as a tool to understand Leptospira physiology and virulence: Recent advances, challenges and clinical implications. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 180, n. SI, p. 80-87, . (17/01411-5, 17/06731-8, 14/50981-0, 17/01102-2, 16/11541-0, 16/04295-3, 16/01384-5)
FERNANDES, LUIS G. V.; PUTZ, ELLIE J.; STASKO, JUDITH; LIPPOLIS, JOHN D.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.; NALLY, JARLATH E.. valuation of LipL32 and LigA/LigB Knockdown Mutants in Leptospira interrogans Serovar Copenhageni: Impacts to Proteome and Virulenc. FRONTIERS IN MICROBIOLOGY, v. 12, . (17/06731-8, 19/20302-8, 19/17488-2)
TEIXEIRA, ALINE F.; CAVENAGUE, MARIA F.; KOCHI, LEANDRO T.; FERNANDES, LUIS G.; SOUZA, GISELE O.; DE SOUZA FILHO, ANTONIO FRANCISCO; VASCONCELLOS, SILVIO A.; HEINEMANN, MARCOS BRYAN; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. Immunoprotective Activity Induced by Leptospiral Outer Membrane Proteins in Hamster Model of Acute Leptospirosis. FRONTIERS IN IMMUNOLOGY, v. 11, . (14/50981-0, 17/06731-8, 18/09652-4, 18/08131-0, 16/11541-0)
KOCHI, LEANDRO T.; FERNANDES, V, LUIS G.; SOUZA, GISELE O.; VASCONCELLOS, SILVIO A.; HEINEMANN, MARCOS B.; ROMERO, ELIETE C.; KIRCHGATTER, KARIN; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. The interaction of two novel putative proteins of Leptospira interrogans with E-cadherin, plasminogen and complement components with potential role in bacterial infection. VIRULENCE, v. 10, n. 1, p. 734-753, . (16/01384-5, 17/06731-8, 14/50981-0)
FERNANDES, LUIS G., V; AVELAR, KATIA E. S.; ROMERO, ELIETE C.; HEINEMANN, MARCOS B.; KIRCHGATTER, KARIN; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. A New Recombinant Multiepitope Chimeric Protein of Leptospira interrogans Is a Promising Marker for the Serodiagnosis of Leptospirosis. TROPICAL MEDICINE AND INFECTIOUS DISEASE, v. 7, n. 11, p. 14-pg., . (17/06731-8, 19/17488-2)
DAROZ, BRENDA B.; FERNANDES, LUIS G. V.; CAVENAGUE, MARIA F.; KOCHI, LEANDRO T.; PASSALIA, FELIPE J.; TAKAHASHI, MARIA B.; NASCIMENTO FILHO, EDSON G.; TEIXEIRA, ALINE F.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. A Review on Host-Leptospira Interactions: What We Know and Future Expectations. FRONTIERS IN CELLULAR AND INFECTION MICROBIOLOGY, v. 11, p. 13-pg., . (18/06201-1, 18/08131-0, 17/01102-2, 17/26223-7, 16/11541-0, 18/09652-4, 18/21959-8, 19/17488-2, 17/06731-8)
SANTOS, JADEMILSON C.; HANDA, SUMIT; FERNANDES, LUIS G. V.; BLEICHER, LUCAS; GANDIN, CESAR A.; DE OLIVEIRA-NETO, MARIO; GHOSH, PARTHO; NASCIMENTO, ANA LUCIA T. O.. Structural and biochemical characterization of Leptospira interrogans Lsa45 reveals a penicillin-binding protein with esterase activity. Process Biochemistry, v. 125, p. 13-pg., . (14/50981-0, 17/25167-6, 18/20321-0, 19/17488-2, 17/06731-8)
FERNANDES, LUIS G., V; STONE, NATHAN E.; ROE, CHANDLER C.; GORIS, MARGA G. A.; VAN DER LINDEN, HANS; SAHL, JASON W.; WAGNER, DAVID M.; NALLY, JARLATH E.. Leptospira sanjuanensis sp. nov., a pathogenic species of the genus Leptospira isolated from soil in Puerto Rico. INTERNATIONAL JOURNAL OF SYSTEMATIC AND EVOLUTIONARY MICROBIOLOGY, v. 72, n. 10, p. 9-pg., . (19/20302-8, 17/06731-8)
FERNANDES, L. G. V.; GUAMAN, L. P.; VASCONCELLOS, S. A.; HEINEMANN, MARCOS B.; PICARDEAU, M.; NASCIMENTO, A. L. T. O.. Gene silencing based on RNA-guided catalytically inactive Cas9 (dCas9): a new tool for genetic engineering in Leptospira. SCIENTIFIC REPORTS, v. 9, . (17/06731-8, 14/50981-0)

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