Efeito do nocaute da mitofusina 2 sobre a mitocôndria, o retículo endoplasmático e a mitofagia em oócitos murinos

Resumo

As mitofusinas 1 (Mfn1) e 2 (Mfn2) são GTPases transmembranares presentes na membrana mitocondrial externa e envolvidas na regulação da fusão mitocondrial. Uma vez que o Mfn2 também está presente na membrana do retículo endoplasmático (RE), ele também é responsável por regular a morfologia e interação deste com a mitocôndria. Assim, são crescentes as evidências de que o Mfn2 desempenha um papel chave na regulação da função mitocondrial e da ER assim como da via autofágica. Todavia, pouco se sabe sobre a sua função no oócito. Recentemente, observamos que o nocaute condicional do Mfn2 em oócito murinos não afeta a fertilidade, mas resulta em hiperglicemia na prole. Ademais, a supressão da expressão do Mfn2 impede a eliminação de DNA mitocondrial (mtDNA) mutante no oócito, resultando em descendentes com níveis mais elevados da mutação. Sendo assim, o objetivo deste trabalho é investigar os mecanismos moleculares que resultam nesses fenótipos. Os efeitos do nocaute do Mfn2 no oócito serão avaliados considerando a função da mitocôndria, do RE e a ocorrência de mitofagia. Para tanto, oócitos selvagens e nocaute, contendo >45% de mtDNA mutante, serão comparados quanto a expressão de genes envolvidos com a via glicolítica, a ß-oxidação, a função mitocondrial, a dinâmica mitocondrial, a função do RE, a via mitofágica e a competência de desenvolvimento do oócito. Por microscopia eletrônica de transmissão, de fluorescência e western blot, também será analisado se esses oócitos diferem quanto à atividade mitocondrial, a produção de espécies reativas de oxigênio, o conteúdo de gotas lipídicas e a ativação da via mitofágica. Espera-se com essas análises esclarecer as vias moleculares que conectam o Mfn2 aos efeitos fenotípicos observados do nocaute deste no oócito. (AU)