Estudo in vitro das condições ideais de digestão enzimática de córneas submetidas a crosslinking

Resumo

O ceratocone é uma doença ocular não inflamatória que afeta o formato e a espessura da córnea, resultando em perda da acuidade visual e consequentemente da qualidade de vida. Nesta doença, a córnea adquire um formato em cone, devido ao afrouxamento das fibrilas de colágeno. Alguns tratamentos são úteis na correção de erros refrativos, mas sem efeito na progressão da doença. O procedimento de crosslinking por riboflavina, estimulada por radiação ultravioleta de 365 nm, mostra-se eficaz no bloqueio da progressão do ceratocone, promovendo um aumento da força biomecânica e da resistência da córnea, com diminuição da taxa de progressão da doença. Recentemente, alguns estudos mostram a possibilidade de aplicação de produtos naturais, como a genipina e as proantocianidinas (classe de polifenóis), na formação de ligações cruzadas na molécula de colágeno. No desenvolvimento do presente projeto, após a formação das ligações cruzadas com polifenóis de extratos vegetais, as córneas serão analisadas frente a sua resistência à digestão enzimática por colagenase. As condições dos ensaios de digestão enzimática, como temperatura de reação e concentração de enzima, serão otimizadas através de planejamento de experimento (DOE). Na sequência, serão realizados ensaios de digestão enzimática em diferentes grupos de córneas tratadas com agentes de crosslinking, os quais serão analisados para determinação da variação de massa e área, entalpia de desnaturação por DSC e teor de hidroxiprolina no sobrenadante. O estudo de metodologias in vitro para a determinação do sucesso do crosslinking de córnea apresenta grande relevância, pois possibilita uma análise de eficiência de agentes químicos ou físicos para o tratamento do ceratocone e outras ectasias. (AU)