Degradação de histatinas salivares em indivíduos com síndrome de Down e influência antibacteriana sobre periodontopatógenos

Resumo

O objetivo deste trabalho será avaliar a proteólise da histatina 1 e da histatina 5 na saliva total de indivíduos com síndrome de Down (SD) e doença periodontal (DP), bem como a ação antibacteriana dos produtos da degradação. Serão selecionados 24 indivíduos, os quais serão divididos igualmente em 4 grupos experimentais (n=6): SD com DP (Grupo SD/cDP), SD sem DP (Grupo SD/sDP), na o sindro micos com DP (Grupo NS/cDP) e na o sindro micos sem DP (NS/sDP - grupo controle). Inicialmente, os voluntários passarão por exame clínico intra-bucal para avaliação da condição periodontal, índices CPO-D e ICDAS. Será realizada a coleta da saliva estimulada até a obtenção de 3,0-4,0 mL. Em seguida, as amostras serão aliquotadas e armazenadas em freezer -80ºC, sendo que parte da saliva será centrifugada para obtenção do sobrenadante da saliva total (SST), e o restante da amostra não centrifugada será utilizada para a análise microbiológica. Os níveis das bactérias Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter actinomycetemcomitans na saliva dos participantes serão quantificados pela Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qPCR). A degradação proteica será realizada pela adição de histatina 1 e histatina 5 sintéticas ao SST puro ou diluído (1:10), sendo as amostras então incubadas à 37ºC nos tempos 0, 0.5, 1.5, 4, 6, 8, 24 e 48 horas. Em seguida serão realizadas as análises de cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (CLAE-FR), eletroforese em gel de policrilamida catiônica (PAGE) e espectrofotometria de massa. Para o ensaio de inibição de crescimento bacteriano, as histatinas 1 e 5 serão diluídas em caldo BHI suplementado e cepas padrão de Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277) e Agreggatibacter actinomycetemcomitans (JP2) serão adicionadas a esta mistura, na concentração de 1x104UFC/mL. As placas serão incubadas por 48 horas a 30ºC em jarra de anaerobiose e o crescimento será avaliado por densidade ótica a 620 nm. Os valores serão corrigidos pela absorbância do caldo BHI e os valores de concentração inibitória (IC50) serão determinados pela curva de inibição do crescimento. Os testes estatísticos serão definidos em função dos fatores de variação dos experimentos e após análise do conjunto de dados quanto a sua distribuição e homocedasticidade. O nível de significância estabelecido será de 5%.