Efeitos do ácido docosahexaenóico individualmente ou em combinação com éster de ftalato no testículo fetal de camundongo

Resumo

Ftalatos são substâncias endócrinas ativas (SEA) amplamente utilizadas como plastificantes. Entre os SEA, o di-(etilhexil) ftalato (DEHP) é um desregulador endócrino muito relevante (DE) para a exposição humana. Após absorção, o DEHP é rapidamente hidrolisado em mono-(2-etilhexil) ftalato (MEHP), o seu metabólito ativo. Muitos estudos confirmaram os efeitos tóxicos da exposição ao MEHP para a reprodução, tais como perturbações nos hormônios reprodutivos, diminuição da distância anogenital e perda de células germinativas, no feto. Evidências recentes indicam que os ftalatos interferem nas vias de sinalização de alguns receptores nucleares (RN) e desregulam o metabolismo de lipídios no testículo fetal humano. O MEHP é ligante de PPAR gama (PPARy) e a diminuição da expressão de RNAm para este receptor foi relacionada à redução no número de gonócitos seguida da exposição in vitro de testículo fetal humano ao MEHP. Entretanto, ao contrário dos ftalatos, o ácido docosahexaenóico (22: 6 n-3), um ácido graxo polinsaturado de cadeia longa (APCL) abundantemente encontrado em algumas espécies de peixe, parece ter efeitos benéficos sobre o sistema reprodutor masculino, especialmente sobre a espermatogênese e a motilidade dos espermatozoides. A suplementação de APCL tem sido recomendada em todo o mundo para mulheres grávidas, mas as conseqüências da exposição in utero ao DHA sobre o desenvolvimento dos testículos ainda são desconhecidas. Estudos em diferentes tecidos têm mostrado que o DHA pode afetar a sinalização de alguns RN, incluindo o PPARy. Assim, o objetivo deste projeto é examinar os efeitos diretos do DHA no desenvolvimento do testículo de camundongo, e também avaliar se o DHA age sobre os efeitos adversos da exposição ao MEHP. Nossas análises serão baseadas em um poderoso sistema de cultura de órgão, previamente estabelecido pelo grupo de pesquisa com o qual este trabalho será realizado. Resumidamente, um testículos de cada embrião será cultivados durante 3 dias com 0,1% de DMSO (controle), ou 20uM de MEHP, ou 50 uM de DHA ou ambos (20uM de MEHP mais 50 uM de DHA). Os testículos serão processados para microscopia de luz e o número total de gonócitos será determinado com base em ensaios imunocitoquímicos para o hormômio anti-Müleriano (HAM). A cinética de proliferação e de morte destas células serão avaliadas pela medição de incorporação de BrdU (5-bromo-2-desoxiuridina), e através da combinação de marcação para o HAM (um marcador específico de células de Sertoli) e caspase-3 clivada, respectivamente. Os níveis plasmáticos de testosterona também serão considerados. Os níveis de transcrição de PPAR será avaliado por qPCR e a separação de populações celulares pela técnica de citometria de fluxo será utilizada para investigar os efeitos do MEHP e do DHA em populações de células somáticas e gonócitos. A análise aqui proposta irá fornecer novas informações sobre a ação fisiológica do DHA no testículo fetal e as possíveis implicações da suplementação materna com este APCL, bem como sua interferência sobre os efeitos dos ftalatos.