Avaliação de mediadores da via de sinalização do fator de necrose tumoral-± e de microRNAs na carcinogênese gástrica associada a Helicobacter pylori

Resumo

Infecção persistente por Helicobacter pylori promove inflamação crônica e consequente desenvolvimento de lesões gástricas que podem progredir para ocâncer gástrico do tipo intestinal. A resposta inflamatória desencadeada por este patógeno é caracterizada pela indução da expressão de citocinas inflamatórias, dentre as quais se destaca o fator de necrose tumoral (TNF)-± que apresenta função promotora tumoral. A sinalização de TNF-± pode resultar em ativação gênica ou morte celular e depende de dois receptores principais: TNFR1 e TNFR2. O receptor TNFR1 pode tanto ativar a via indutora de apoptose quanto estimular a transcrição de genes envolvidos com a sobrevivência celular. O controle entre estas duas vias é regulado em vários níveis e alteração na sinalização desencadeada por TNFR1 pode levar ao processo carcinogênico. A indução da apoptose depende do recrutamento da proteína adaptadora TRADD e caspase 8, enquanto que a transcrição de genes é resultado da ativação de NF-ºB e envolve a participação de TRAF2, TRAF1 e RIP. Estudos apontam papel acentuador do receptor TNFR2 no efeito citotóxico de TNFR1, além de indução de apoptose e sobrevivência celular de modo independente do receptor 1. A desregulação na expressão de genes envolvidos nesta via pode ser causada por microRNAs (miRNAs) no nível pós-transcricional e estudos mostram que eles podem regular o processo inflamatório induzido pela H. pylori, como também a carcinogênese gástrica. Além disto, infecção por esta bactéria pode alterar a expressão destes miRNAs e, com isto, influenciar em vários mecanismos moleculares. Desta forma, o objetivo deste estudo é avaliar em linhagem celular de câncer gástrico, sob condição de inflamação induzida pelo extrato da H. pylori, a ocorrência de alterações e redes de interação em genes e miRNAs envolvidos na via de apoptose mediada por TNF-± e a atuação dos receptores TNFR1 e TNFR2, assim como as consequências em processos celulares, como proliferação e apoptose. Também investigar se a expressão desses genes e miRNAs encontram-se desreguladas em lesões que participam da cascata de progressão do câncer gástrico e se é influenciada pela infecção da H. pylori. Portanto, os objetivos específicos são: a- Avaliar a expressão quantitativa do RNAm de mediadores e receptores da via extrínseca da apoptose mediada por TNF-± (TNFA, TNFR1, TNFR2, TRADD, TRAF2, cFLIP, IL1B, IL6, CASP3 e CASP8) e de miRNAs que alvejam TNFA ou mediadores da sua via de sinalização (hsa-miR-19a-3p, hsa-miR-34a-3p, hsa-miR-103-3p, hsa-miR-181c-5p, hsa-miR-370-3p) em linhagens celulares de adenocarcinoma gástrico (AGS e MKN-45), após a indução com extrato da H. pylori, com e sem silenciamento dos receptores TNFR1 e TNFR2, assim como o efeito destes tratamentos na proliferação celular e apoptose; b- Avaliar a expressão dos mesmos genes e miRNAs em lesões da cascata de progressão do câncer gástrico (gastrite crônica, metaplasia intestinal e câncer) com e sem infecção pela H. pylori; c- Pesquisar em bancos de dados públicos a predição de genes-alvos dos miRNAs, construir a rede de interação miRNAs-mRNA, além da validação funcional. Os resultados poderão evidenciar alterações em processos celulares resultantes de mudanças na expressão de genes e miRNAs envolvidos na via de sinalização do TNF-± na carcinogênese gástrica, e qual receptor (TNFR1 e/ou TNFR2 ) contribui mais efetivamente para as alterações nesta via de sinalização desencadeada pela H. pylori. Portanto, podendo contribuir para a melhor compreensão da via e papel dos receptores TNFR1 e TNFR2 e indicar alvos moleculares e estratégias terapêuticas no processo inflamatório e câncer gástrico.