Estudo de mutações somáticas identificadas em sequenciamento de exoma de hepatoblastoma

Resumo

Hepatoblastomas são tumores embrionários do fígado, com manifestação muito precoce e aspectos histológicos que se assemelham a diferentes fases da diferenciação deste órgão. Em decorrência de sua raridade, dados moleculares referentes à carcinogênese de hepatoblastomas ainda são escassos. Durante a embriogênese, uma alteração ou bloqueio do processo normal de diferenciação celular e/ou organogênese pode resultar em anomalias congênitas ou, eventualmente, no desenvolvimento de um tumor embrionário. A ruptura dos processos de diferenciação e organogênese normais do fígado é a hipótese de origem para tais tumores embrionários; assim, a identificação de vias gênicas implicadas na origem de hepatoblastomas pode ampliar a compreensão acerca da conexão entre diferenciação anormal e câncer. O sequenciamento de exoma em um grupo de seis hepatoblastomas e suas bordas pareadas foi previamente realizado, visando a identificação de variantes raras em regiões codificadoras do genoma, potencialmente contribuintes do processo de tumorigênese. A proposta do presente projeto é analisar estes dados de exoma de hepatoblastomas, com anotação das variantes genômicas raras para detecção de eventos mutacionais somáticos e germinativos possivelmente patogênicos, bem como a validação das alterações por meio de painel de sequenciamento de nova geração. Um grupo independente de 13 hepatoblastomas será utilizado com a intenção de investigar a presença de variantes genéticas raras potencialmente associadas à tumorigênese de hepatoblastomas. O impacto funcional de algumas das mutações identificadas como mais relevantes para este tipo tumoral serão objeto de estudo em ensaios em diferentes linhagens celulares de hepatócitos, normais e tumorais. Parte dos objetivos propostos neste projeto já estão em fase de finalização, gerando resultados promissores que impulsionaram o pedido de mudança de nível de mestrado para doutorado direto, já aceito pela Instituição na qual a aluna desenvolve sua pós-graduação. Da análise dos dados de mutações somáticas dos hepatoblastomas, um total de 65 variantes somáticas raras foram validadas em outra plataforma de sequenciamento, além do exoma (target sequencing). Um dos genes revelados nesta análise foi CTNNB1, no qual 4 diferentes mutações patogênicas foram detectadas em 4 tumores. O estudo de expressão proteica da beta-catenina foi realizado em amostras de 8 hepatoblastomas, assim como em tissue-microarray constituído por 30 diferentes hepatoblastomas; a ativação da via da beta-catenina foi confirmada na maioria dos tumores, com detecção de translocação da proteína para o núcleo no caso dos tumores portadores das mutações identificadas por exoma em CTNBB1. Adicionalmente, uma mutação somática rara e recorrente no gene CX3CL1 foi detectada em 3 HBs por exoma, tendo sido validada em dois deles por target sequencing; portanto, este gene tornou-se um importante candidato para a tumorigênese de hepatoblastomas e parte da proposta de doutorado direto está pautada na ampliação do estudo deste gene, além de outros. Parte importante deste projeto também será a investigação de mutações germinativas potencialmente associadas à predisposição ao desenvolvimento de hepatoblastomas nestes pacientes. (AU)