Efeito de Injeções Locais de Células-Tronco Mesenquimais ou Osteoblastos na Regeneração do Tecido Ósseo

Resumo

O osso é um tecido com grande capacidade de regeneração, mas em algumas situações a extensão da injúria impede o reparo do tecido. Nesse cenário, a terapia celular tem atraído a atenção de diversos grupos de pesquisa por ser uma alternativa promissora em relação aos tratamentos existentes. No entanto, muitos aspectos experimentais necessitam ser melhor investigados para tornar essa terapia um tratamento efetivo para a regeneração de defeitos do tecido ósseo. Sendo assim, o objetivo desse estudo será avaliar o potencial de células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas de medula óssea (CTMs-MO) e de tecido adiposo (CTMs-TA), bem como de osteoblastos diferenciados a partir dessas CTMs para regenerar o tecido ósseo quando injetadas (injeções repetidas) diretamente em defeitos criados em calvárias de ratos. Para isso, CTMs serão obtidas de medula óssea e de tecido adiposo inguinal de ratos, expandidas in vitro e mantidas com características de CTMs ou diferenciadas em osteoblastos. As CTMs serão caracterizadas por imunofenotipagem por citometria de fluxo para os marcadores CD29, CD31, CD34, CD45, CD90 e CD106. A diferenciação osteoblástica será confirmada por avaliação da expressão gênica de Runx2, fosfatase alcalina e osteocalcina por PCR em tempo real. Para os experimentos in vivo, inicialmente o tempo de permanência das células dos quatro grupos, (1) CTMs-MO, (2) CTMs-TA, (3) osteoblastos diferenciados a partir de CTMs-MO e (4) osteoblastos diferenciados a partir de CTMs-TA, nos defeitos ósseos será avaliado por bioluminescência utilizando a injeção de células que expressam luciferase. Dessa forma, será possível determinar a quantidade de injeções necessárias e o intervalo entre elas. Duas semanas após a criação dos defeitos ósseos será realizada a primeira injeção de células e ao final de oito semanas, o tecido ósseo neoformado será avaliado por microtomografia computadorizada, análise histológica e análise do módulo de elasticidade e da dureza. Os dados serão submetidos ao teste de aderência à curva normal para determinar o teste estatístico adequado. Os resultados desse estudo poderão estabelecer novos parâmetros com relação à injeção de células para regenerar tecido ósseo, visto que, até o momento, não há na literatura estudos avaliando o efeito de injeções repetidas.