Efeitos das terapias fotodinâmica e sonodinâmica na matriz extracelular de biofilme de Candida albicans

Resumo

Infecções causadas por biofilmes de Candida spp. são de grande importância, especialmente em pacientes imunocomprometidos. A resistência dos biofilmes de Candida spp. aos medicamentos pode estar associada com o efeito de proteção dos componentes da matriz extracelular (MEC). A Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (PDT) e a Terapia Sonodinâmica (SDT) têm sido sugeridos como tratamentos alternativos para a inativação de micro-organismos. A SDT segue os princípios da PDT, em que utiliza um agente sensibilizador em combinação com um ultrassom, ao invés da luz. No entanto, não há nenhuma pesquisa que avaliou o efeito da PDT e da SDT na MEC de biofilmes de Candida albicans. Portanto, o objetivo deste estudo é avaliar o efeito da PDT e SDT, mediadas pelos sensibilizadores Rosa Bengala (RB) ou Photodithazine (PDZ), sobre a MEC de biofilmes de C. albicans e a capacidade destas terapias em inativar este fungo. Este projeto será conduzido sob a supervisão do Professor John Callan, na Universidade de Ulster. Suspensões padronizadas (107 CFU/mL) de C. albicans (ATCC 90028) serão cultivadas em superfícies de poliestireno em meio RPMI a 37°C durante 48 h, para a formação de biofilme. Para o tratamento com SDT, os biofilmes serão incubadas com RB ou PDZ no escuro, durante um período de 10 ou 20 minutos, respectivamente. Então, os biofilmes serão sonicados durante 60 minutos (1 MHz de freqüência, 3 W/cm² de densidade de potência, 50% do ciclo de funcionamento e frequência de pulso de 100 Hz). Amostras adicionais serão tratados apenas com os sensibilizadores (RB ou PDZ), apenas com o ultrassom ou não receberão tratamento (grupo controle). Para o tratamento com PDT, os biofilmes também serão incubadas com RB ou PDZ nos mesmos períodos, e, em seguida, os biofilmes serão irradiados com uma luz de fibra óptica (560 nm, 20 J/cm²) ou um diodo emissor de luz (660 nm; 50 J/cm²), respectivamente. Da mesma maneira que na SDT, amostras adicionais serão tratados apenas com os sensibilizadores, apenas com a luz ou não receberão tratamento. A combinação PDT+SDT também será avaliada. Para isso, as amostras adicionais serão incubadas com os sensibilizadores (PDZ ou RB), em seguida, os biofilmes serão simultaneamente irradiados por luz e sonicadas por ultrassom, sob as mesmas condições. Após os tratamentos, os biofilmes serão processados para avaliação dos componentes da MEC:polissacarídeos solúveis em água -WSP, polissacarídeo solúvel alcalino - Asp, proteínas e DNA extracelular -eDNA, unidades formadoras de colônias - UFC e biomassa total. Os efeitos dos tratamentos na expressão de proteínas também serão determinados usando gel de eletroforese e espectroscopia de massa. Alterações na estrutura do biofilme serão avaliadas por Microscopia de Confocal. Os dados serão analisados pelos testes estatísticos mais apropriados. (AU)