Identificação de interações soma-linhagem germinativa que possam afetar a longevidade em Caenorhabditis elegans

Resumo

C. elegans é um modelo amplamente usado como modelo para estudo do envelhecimento por conta de sua curta longevidade e presença de genes conservados que podem ser facilmente silenciados através da alimentação dos vermes com bactérias contendo RNAs dupla-fita específicos. Vermes carregando uma mutação que leva à perda de função do gene glp-1, não desenvolvem a linhagem germinativa, e por isso, são longevos; um fenômeno diretamente associado à localização nuclear do fator de transcrição DAF-16/FOXO em células somáticas. Quando usamos RNAi por alimentação para identificar genes que interagiam com este fenótipo, identificamos surpreendentemente, que nosso vetor controle L4440, bloqueava a translocação de DAF-16 no intestino do mutante glp-1. Isso não foi observado no verme selvagem após estresse térmico - intervenção que também leva à translocação de DAF-16. Os efeitos do L4440 são dependentes da produção intrínseca de RNA dupla-fita, e não ao esqueleto do verme, já que a remoção do multiple cloning site (MCS) ou dos promotores T7 reverteram o fenótipo de DAF-16. A ativação da via de RNAi não foi suficiente para explicar o efeito do L4440, visto que observador localização nuclear de DAF-16 nos mutantes glp-1, quando foram tratados com RNAi contra genes endógenos (pos-1 ou lin-1). Para confirmar se o RNA de dupla-fita expresso pela região MCS está inibindo a localização nuclear de DAF-16 no mutante glp-1, nós pretendemos injetar diretamente esse fragmento nos vermes. Adicionalmente, nós queremos testar se esse fenômeno ocorre em outro modelo de ausência de linha germinativa usando laser para eliminar células precursoras da linhagem germinativa. Resumidamente, nossos resultados sugerem que o RNA dupla-fita exógeno produzido pelo L4440 inibe a translocação de DAF-16 em animais sem linhagem germinativa. Consequentemente, os resultados desse projeto são uma nota de precaução para o uso irrestrito do vetor L4440 em experimentos de RNAi em C. elegans. Além disso, poderia fornecer informações sobre como a via de RNAi afeta a longevidade.