Investigação de efeitos de superfície e presença de coroa protéica no processo de internalização celular de sistemas poliméricos nanoestruturados

Resumo

O projeto proposto tem como objetivo central a verificação do papel de parâmetros estruturas e efeitos de superfície na internalização celular de sistemas poliméricos nanoestruturados. A primeira etapa prevê a fabricação de nanopartículas poliméricas produzidas a partir de copolímeros em bloco biocompatíveis e sensíveis ao pH (PEOm-b-PDPAn, PMPCm-b-PDPAn e PHPMAm-b-PDPAn). Estas nanopartículas serão marcadas com a sonda fluorescente cumarina-6. A dinâmica, estrutura e morfologia das entidades nanométricas serão detalhadamente investigadas por técnicas de espalhamento de luz (dinâmico - DLS, estático - SLS e eletroforético - ELS) além de microscopia de força atômica (AFM). Na sequencia, a influência das características estruturais e superficiais das NPs no processo de internalização celular será experimentalmente investigada utilizando-se as técnicas de microscopia de fluorescência confocal (LSCM) e citometria de fluxo (FACS). Na Segunda etapa do cronograma proposto para o projeto de doutorado, as nanopartículas poliméricas biodegradáveis serão incubadas em ambiente plasmático e posteriormente se identificará e quantificará as proteínas formadoras da coroa proteica em cada caso. Está etapa será essencialmente conduzida utilizando-se as técnicas de centrifugação, eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa (LC-MS). Posteriormente, serão conduzidos os mesmos ensaios de internalização celular para os complexos proteína-nanopartícula. O objetivo é identificar o efeito da nanobiointerface formada no processo supracitado. Os mesmas investigações serão finalmente conduzidas para NPs de PHPMAm-b-PDPAn funcionalizadas com a sequencia peptídica RGD(RGD-PHPMAm-b-PDPAn).