Detecção de micro-organismos e de seus fatores de virulência na saliva, câmara pulpar e canal radicular de dentes associados ao insucesso endodôntico

Resumo

Na microbiota de infecções secundárias/ persistentes predominam micro-organismos resistentes aos procedimentos endodônticos, capazes de sobreviver em um ambiente restrito em espaço e nutrientes, destacando-se entre eles Enterococcus faecalis. A microinfiltração coronária é um agente etiológico do insucesso do tratamento endodôntico, promovendo uma fonte constante de contaminação da saliva para os canais radiculares. Os objetivos do presente estudo, serão: a) estudar a composição da microbiota da saliva, câmara pulpar e canais radiculares de dentes com insucesso endodôntico, por meio da técnica de checkerboard, de maneira a verificar investigar a similaridade entre os microbiomas presentes nestes 3 sítios; b) quantificar a carga bacteriana total, de Streptococcus spp e de Enterococcus faecalis na saliva, câmara pulpar e canais radiculares, por meio de Real Time - PCR; c) quantificar os níveis de lipopolissacarídeos (LPS) e ácido lipoteicóico (LTA) presentes nos canais radiculares investigados; além de correlacioná-los com os aspectos clínicos e radiográficos dos pacientes. Serão selecionados 20 pacientes com presença de lesão periapical e necessidade de retratamento endodôntico. Amostras do conteúdo endotóxico serão coletadas da saliva, câmara pulpar e canal radicular. O DNA extraído será submetido à polymerase chain reaction (PCR) em tempo real para quantificação da carga bacteriana total, dos níveis de estreptococos e de Enterococcus faecalis. As espécies envolvidas serão também identificadas pelo método do checkerboard usando sondas para 40 diferentes patógenos endodônticos selecionados. As amostras de LPS e LTA serão quantificadas pelos métodos de Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) e Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), respectivamente. Os dados obtidos serão tabulados e estatisticamente analisados pelo SPSS para Windows.