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Construção e caracterização de promotores constitutivos mutantes e de promotores controlados pelos reguladores globais CRP e Fis em Escherichia coli

Processo: 15/22386-3
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2016
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
Pesquisador responsável:Rafael Silva Rocha
Beneficiário:Ananda Sanches Medeiros
Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:12/22921-8 - Abordagens de biologia sintética para decifrar os mecanismos de integração de sinais em promotores bacterianos complexos, AP.JP
Bolsa(s) vinculada(s):17/04938-4 - Comparação da atividade de expressão de promotores sintéticos em cromossomos e plasmídeos, BE.EP.IC
Assunto(s):Biologia sintética   Fisiologia   Regulação da expressão gênica   Cloranfenicol   Escherichia coli   Citometria de fluxo   Microscopia de fluorescência
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Engenharia de promotores | Regulação gênica | Reguladores Globais | Biologia Sintética

Resumo

No organismo bacteriano há os chamados reguladores globais, sendo eles os responsáveis pela regulação da expressão de diversos genes. Como parte desses reguladores temos os fatores de transcrição CRP, Fis e IHF, sendo eles de muita importância para a bactéria. Com isso, a sua ausência em bactérias mutantes pode alterar o metabolismo e crescimento das mesmas, influenciando em mudanças na expressão de genes não só por atuar como seu fator de transcrição, mas também por modificar a fisiologia geral da célula. Dessa forma, o presente plano de trabalho visa a análise do comportamento de alguns promotores descritos na literatura nas três linhagens de E. coli utilizadas como organismos modelos no laboratório (E. coli selvagem, mutante para Fis e mutante para IHF), e assim observar as diferenças na expressão gênica regulada por um mesmo promotor nas três linhagens, permitindo a normalização dos resultados obtidos em experimentos de promotores sintéticos. Outro objetivo de tal projeto é analisar as interações entre dois desses fatores de transcrição, criando uma biblioteca de promotores contendo os operadores para os reguladores CRP e Fis. A biblioteca será montada através da ligação aleatória de sequências consenso para os fatores de transcrição CRP e Fis, produzindo-se promotores sintéticos. Tais promotores sintéticos da biblioteca e os promotores retirados da literatura serão clonados no vetor pMR1, cuja sequência contém o gene repórter GFP e o gene de resistência para cloranfenicol. Os ensaios serão realizados no leitor de placas, citometria de fluxo e microscopia de fluorescência.

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Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SANCHES-MEDEIROS, ANANDA; OLIVEIRA MONTEIRO, LUMMY MARIA; SILVA-ROCHA, RAFAEL. Calibrating Transcriptional Activity Using Constitutive Synthetic Promoters in Mutants for Global Regulators in Escherichia coli. INTERNATIONAL JOURNAL OF GENOMICS, . (16/19179-9, 15/22386-3, 12/22921-8)
MARTINS-SANTANA, LEONARDO; NORA, LUISA C.; SANCHES-MEDEIROS, ANANDA; LOVATE, GABRIEL L.; CASSIANO, MURILO H. A.; SILVA-ROCHA, RAFAEL. Systems and Synthetic Biology Approaches to Engineer Fungi for Fine Chemical Production. FRONTIERS IN BIOENGINEERING AND BIOTECHNOLOGY, v. 6, . (15/22386-3, 17/17924-1, 16/11093-8, 17/04217-5, 16/03763-3, 12/22921-8)
AMORES, GERARDO RUIZ; DE LAS HERAS, AITOR; SANCHES-MEDEIROS, ANANDA; ELFICK, ALISTAIR; SILVA-ROCHA, RAFAEL. Systematic identification of novel regulatory interactions controlling biofilm formation in the bacterium Escherichia coli. SCIENTIFIC REPORTS, v. 7, . (15/22386-3, 12/22921-8)
SANCHES-MEDEIROS, ANANDA; OLIVEIRA MONTEIRO, LUMMY MARIA; SILVA-ROCHA, RAFAEL. Calibrating Transcriptional Activity Using Constitutive Synthetic Promoters in Mutants for Global Regulators in Escherichia coli. INTERNATIONAL JOURNAL OF GENOMICS, v. 2018, p. 10-pg., . (16/19179-9, 12/22921-8, 15/22386-3)

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