Exploração genética sobre os mecanismos de regulação do Sistema de Secreção do Tipo IV em Xanthomonas citri e como esse sistema medeia a morte contato-dependente

Resumo

Durante a morte de bactérias vizinhas induzida pelo Sistema de Secreção do Tipo IV (T4SS) por Xanthomonas citri (Xac), diversas proteínas efetoras são secretadas e injetadas nas células alvo por um mecanismo contato-dependente. O primeiro objetivo deste projeto será investigar a função dessas proteínas efetoras. A avaliação da atividade de deleção de diferentes mutantes efetores em bactérias de diferentes espécies permitirá a discriminação entre efeitos antibacterianos e reguladores de proteínas efetoras distintas. Além disso, a expressão ectópica e condicional de proteínas efetoras combinada com estudos em interação proteica irão indicar seus alvos celulares. O segundo objetivo deste projeto envolve estratégias de inserção de transposon no genoma completo (whole-genome transposon insertion strategies) para identificar todos os loci envolvidos durante a competição de Xac com outras espécies de bactérias. A utilização de "straightforward classical transposon screen" irá revelar mutantes em vias regulatórios, toxinas (além de componentes estruturais do T4SS) e esta busca será expandida por uma técnica de Tn-seq, aumentando drasticamente o conhecimento genético na competição interbacteriana de Xac. Ademais, este objetivo pode revelar mecanismos alternativos que podem funcionar independentemente ou conjuntamente com o T4SS durante a competição interbacteriana. Por fim, o ultimo objetivo deste projeto será a análise da regulação, organização e localização de T4SS durante a competição interbacteriana por meio da combinação de microscopia de fluorescência com resolução temporal com diferentes técnicas de marcação de fluorescência.