Papel da N-glicosilação na expressão gênica relacionada ao remodelamento da parede celular de Paracoccidioides brasiliensis

Resumo

Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, a micose profundade maior prevalência na América Latina. Dentre os fatores próprios do fungo capazes de aumentar sua patogenicidade são mencionados lipídios, polissacarídeos e glicoproteínas. A glicosilação é importante para a secreção, função, estabilidade e imunogenicidade das proteínas. Glicanas N-ligadas a proteínas têm sido caracterizadas em diferentes espécies, de mamíferos aleveduras. Em leveduras de P. brasiliensis, N-glicanas exercem importante papel na atividade deN-acetil-²-D-glicosaminidase (NAGase) e ±-1,4-amilase produzida, e estão diretamente envolvidas no crescimento e na morfogênese do fungo. O fato de N-glicanas influenciarem atividades biológicas de proteínas de P. brasiliensis, motiva-nos a investigar, os efeitos da inibição da N-glicosilação sobre a regulação da expressão de NAGase, ± e ²-1,3-glucanase, e ±-1,4-amilase, ou seja, de enzimas relacionadas à biosíntese/degradação da parede celular de P.brasiliensis. Para tanto, propomo-nos a cumprir as seguintes metas: (1) avaliar o efeito da inibição de N-glicosilação (proporcionada pelo uso de tunicamicina) sobre a expressão de genes relacionados à degradação da parede celular em leveduras de P. brasiliensis; (2) determinar ossítios preditos de glicanas N-ligadas, bem como a estrutura tridimensional (3D) predita dasenzimas citadas anteriormente; (3) comparar a estrutura 3D predita obtida com a estrutura 3D predita das mesmas enzimas em outros fungos dimórficos, tais como Coccidioides immitis,Candida albicans, Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum. Nossa expectativa é de que o cumprimento dessas metas permita que se investigue a existência de associação direta entre o processo de N-glicosilação com genes e proteínas relevantes para o crescimento, a morfogênesee a patogenicidade de P. brasiliensis.