Análise qualitativa e quantitativa do fator ativador de plaquetas (PAF) em plasma humano, empregando a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (HPLCMS/MS)

Resumo

Mediadores lipídicos, tais como prostaglandinas (PGs), leucotrienos (LTs), lipoxinas (LXs) e Fator Ativador de Plaquetas (PAF) são importantes no desenvolvimento e/ou na resolução da resposta inflamatória. A biossíntese de eicosanoides (EICs) e do PAF envolve a ativação da enzima fosfolipase A2 (PLA2) e posterior liberação do ácido araquidônico (AA) e do liso-PAF. O AA livre é então oxigenado pelas lipoxigenases ou ciclooxigenases a eicosanoides enquanto que o liso-PAF é acetilado e convertido para PAF pela acetil-CoA/liso-PAF-acetiltransferase. Assim como os EICs, os PAFs são potentes mediadores lipídicos e estão envolvidos em muitas funções fisiológicas e fisiopatológicas, incluindo a agregação plaquetaria, ativação de neutrófilos, diferenciação neuronal e na resposta inflamatória. Ainda hoje, o ensaio imunoenzimático (ELISA) é amplamente empregado para a determinação quantitativa de PAF em amostras biológicas. Apesar de altamente sensíveis, o ELISA não permite distinguir entre as diferentes isoformas, como por exemplo os PAF-C16:0, PAF-C18:0 e PAF-C18:1. A seletividade na identificação dos PAFs é um requisito importante para a compreensão de eventos relacionados a estes lipídeos, pois sabe-se que as diferentes isoformas podem estar associadas às condições biológicas distintas. Neste contexto, a espectrometria de massas sequencial (MS/MS) pode fornecer informações estruturais de fosfolipídios a partir dos seus padrões de fragmentação, em experimentos de dissociação induzida por colisão (CID), o que permite o desenvolvimento de métodos de detecção altamente seletivos, baseados nos espectros de MS/MS característicos de cada composto. Aliado à cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), que permite separar os compostos por tempo de eluição em coluna cromatográfica, a HPLC-MS/MS (cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas) é uma ferramenta analítica que permite resultados com grande sensibilidade e seletividade, e tem sido aplicada com sucesso para a análise de diferentes fosfolipídios em matrizes biológicas.