Caracterização funcional do complexo R2TP em diferentes organismos

Resumo

A manutenção da homeostase proteica é crítica para a sobrevivência celular e as chaperonas moleculares são essenciais para este processo. Uma das proteínas mais importantes envolvidas neste processo é a Hsp90, que também tem papéis importantes numa variedade de funções celulares. O grupo do Dr. Walid A. Houry na Universidade de Toronto (Canadá) identificou 627 possíveis proteínas que interagem com a Hsp90 e descobriu o complexo R2TP em leveduras. Este complexo é formado pelas helicases Rvb1 e Rvb2 que são altamente conservadas em eucariotos e se ligam fortemente as proteínas Pih1 e Tah1, cofactores da Hsp90. Notavelmente, muitos estudos têm mostrado uma grande variedade de carcinomas que possuem expressão aumentada as proteínas Rvb1 e Rvb2. Além disso, a Pih1 de levedura, conhecida como PIH1D1 em humanos, interage com vários componentes da célula e a Tah1, contém motivos com repetições de tetratricopeptídeos (TPR) que interagem com o motivo MEEVD do C-terminal da Hsp90, conhecido por mediar a interacção da Hsp90 com a suas co-chaperonas. Neste sentido, o grupo do Dr. Carlos Ramos da Unicamp (Brasil) têm estudado ortólogos do complexo R2TP em Leishmania major, um protozoário parasita intracelular obrigatório que provoca uma doença humana denominada leishmaniose cutânea. O complexo R2TP parece desempenhar um papel crítico na rápida multiplicação destes parasitas e nosso grupo especula que o complexo R2TP também é importante para o parasita Leishmania major tal como em seres humanos e leveduras. Apesar dos avanços nos estudos do complexo R2TP-Hsp90 em diferentes processos biológicos, a compreensão de suas funções celulares e especificamente o mecanismo de função ainda é pouco compreendido. Portanto, este projeto pretende realizar uma colaboração de dois grupos de pesquisa com o objetivo de elucidar a base molecular da atividade do complexo R2TP em diferentes organismos. Diante do exposto, este projeto tem como objetivo investigar o complexo R2TP pela (1) caracterização da atividade ATPásica e de helicase das proteínas de Rvb1/2 e, (2) usar o sistema de levedura e células de mamíferos para compreender a base molecular deste complexo. O conhecimento adquirido com este estudo irá auxiliar na compreensão das proteínas ortólogas no protozoário. Por fim, estas técnicas e abordagens irão propiciar à estudante de doutorado uma oportunidade única para expandir seus horizontes científicos, para "pensar fora da caixa" e ser capaz de solucionar problemas com diferentes perspectivas. (AU)