Envolvimento da via da GRASP na externalização da dissulfeto isomerase proteica-A1 e sua implicação na resposta de células endoteliais a shear stress

Resumo

Dissulfeto isomerase proteica (PDI A1 ou PDI) é uma chaperona essencial para o enovelamento proteico redox no reticulo endoplasmático, com papel emergente em vias de sinalização e homeostase redox, incluindo particularmente interação com NADPH oxidases. Um pool específico da PDI ocorre no espaço extracelular de vários tipos celulares e regula processos como trombose, adesão celular, infecção viral e remodelamento vascular. Este pool, denominado PDI epi/pericelular (pecPDI), modula reações tiol-redox que regulam integrinas, trombospondina, metaloproteases, galectina 9, glicoproteína gp120 do vírus HIV e fator tecidual, dentre outros. A interação entre pecPDI e integrinas (um importante mecanosensor) e o papel redox da pecPDI sugerem uma possível modulação pela pecPDI da resposta a shear stress em células endoteliais. Nosso grupo investiga a rota de externalização da PDI e recentemente identificamos uma via independente de Golgi e envolvendo GRASP, uma proteína recém-descrita como via não convencional de secreção. Nossa hipótese é que em resposta a shear stress em células endoteliais, a pecPDI é externalizada pela via GRASP e, juntamente com outras ações potenciais de GRASP, age como um mecanismo integrador de mecanotransdução. Investigaremos o efeito da via GRASP-pecPDI na ativação de integrinas e organização do citoesqueleto, assim como mecanismos subcelulares associados, em resposta a shear stress laminar em células endoteliais. Neste sentido, avaliaremos, em resposta a shear stress laminar: a cinética de externalização da PDI, proteínas interatoras com PDI na superfície celular, efeito de pecPDI na ativação de integrinas, alteração do estado redox de integrina e PDI, efeito do ganho e perda de função de GRASP55/65 e fosforilação da GRASP. Estes dados devem contribuir para um entendimento integrado de vias de mecanotransdução endotelial, possibilitando avanços conceituais e implicações fisiopatológicas.