Análise da relação funcional entre eIF5A e o fator de transcrição Hac1 na levedura Saccharomyces cerevisiae

Resumo

O fator de tradução de eucariotos 5A (eIF5A) é altamente conservado em arqueas e mamíferos e sofre uma modificação pós-traducional única e essencial chamada hipusinação. Embora eIF5A tenha sido inicialmente associada com o início da tradução, essa função nunca foi claramente demonstrada. Os resultados recentes do nosso e de outros laboratórios fortalecem o envolvimento de eIF5A com a elongação da tradução. Alguns desses estudos relacionaram eIF5A com a via secretória e resposta a estresse de Retículo Endoplasmático (RE), sugerindo a participação deste fator na tradução específica de subgrupos de mRNAs. O fator de transcrição de proteínas responsivas ao estresse de RE, Hac1, é o principal elemento da via UPR (Unfolded Protein Response). Com o objetivo de estudar o papel biológico de eIF5A e seu possível mecanismo de ação na tradução específica de fatores envolvidos na resposta ao estresse de RE, pretende-se avaliar a relação funcional entre eIF5A e Hac1, usando como organismo modelo a levedura Saccharomyces cerevisiae. Para tanto, é proposta a quantificação do mRNA e da proteína Hac1 e Ire1, ativador de Hac1, por ensaios de PCR em tempo real e western blot, respectivamente. Ainda, para explorar a possível interação de eIF5A com outros fatores da via de estresse de retículo, serão realizadas análise de interações genéticas com alelos mutantes de TIF51A e alelos mutantes ou deleções de genes que codificam proteínas envolvidas nessa via. Por fim, será realizada uma análise de localização subcelular de Hac1 e Ire1, fusionados a proteína fluorescente GFP (Green Fluorescent Protein), por microscopia de fluorescência, em mutantes de eIF5A. Este estudo contribuirá consideravelmente para o esclarecimento do possível papel de eIF5A na tradução específica de mRNAs envolvidos na via secretória e resposta ao estresse de RE. (AU)