Detecção dos vírus da familia herpesviridae na mucosa bucal de pacientes irradiados para tratamento de Carcinoma espinocelular em região de cabeça e pescoço

Resumo

As neoplasias malignas em cabeça e pescoço estão em 6º lugar no mundo, com mais de 15000 casos por ano no Brasil, e o carcinoma espinocelular (CEC) responde por 90% dessas neoplasias. A radioterapia (RT) é uma técnica de tratamento antineoplásico capaz de proporcionar 80% de controle do crescimento tumoral para as neoplasias grau 1 e 70% para as de grau 2 (possibilitando preservar importantes estruturas anatômicas). A mucosite bucal é uma sequela aguda frequente da RT de cabeça e pescoço, podendo inclusive, levar à interrupção do tratamento antineoplásico. É bem estabelecida na literatura, a correlação entre a excreção salivar do vírus herpes simples (HSV-1), e o desenvolvimento de mucosite ulcerativa em pacientes em quimioterapia. Entretanto, não existem estudos, que identifiquem a importância dos vírus da família Herpesviridae, no desenvolvimento da mucosite bucal decorrente da RT. A identificação da excreção dos vírus da família Herpesviridae na boca de pacientes sob RT em cabeça e pescoço e a eventual associação entre a replicação ativa destes vírus no desenvolvimento da mucosite bucal, poderá permitir a elaboração de estratégias mais eficientes de prevenção, controle e preservação da saúde bucal, melhorando assim a qualidade de vida dos pacientes submetidos a RT em cabeça e pescoço. O objetivo do trabalho é avaliar a excreção oral dos herpes vírus humano (HSV- 1, HSV - 2, EBV, CMV, VZV, HH6, HHV7 e HHV8) e sua possível associação com o surgimento e o desenvolvimento da mucosite bucal em pacientes sob RT para tratamento de CEC de boca e orofaringe. Serão incluídos nesse estudo, 20 pacientes adultos, de ambos os sexos, diagnosticados com CEC de cabeça e pescoço, que receberão dose de RT maior ou igual a 60Gy e que concordarem em assinar o termo de consentimento livre e esclarecido. Planeja-se, coletar amostras do lavado bucal dos pacientes sob RT em cabeça e pescoço, juntamente com a avaliação clínica da mucosa bucal. A cada 15 dias, serão coletadas também, amostras de sangue desses pacientes. Os pacientes envolvidos no estudo serão instruídos a realizar um bochecho com 10 ml de solução de Clorexidina 0,12%, por 30 seg., e depositar o líquido bochechado em um tubo coletor Falcon® (15mL). A primeira coleta será realizada antes do início da primeira sessão de RT e serão realizadas 2 coletas de saliva por semana, até o término do tratamento. Decorridos 60 dias do final da RT, mais uma amostra será coletada. As amostras serão mantidas em geladeira por 3 hs e em seguida armazenadas a -80ºC até o posterior processamento do material no Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP). A extração de DNA viral das amostras, será realizada tomando-se como base as técnicas especificadas no kit "QIAamp DNA Mini Kit" (QIAGEN Inc., USA). A reação para amplificação do DNA viral será desenvolvida utilizando dois sets de primers que se alinham a uma região bem conservada do gene da DNA polimerase dos vírus da família Herpesviridae. Utilizando-se o primeiro set de primers HSVP1 e HSVP2 para amplificação de HSV-1, HSV-2, EBV, CMV e HHV8, e para amplificação do DNA de VZV , HHV-6 (A e B) e HHV-7, serão utilizados os set de primers VZVP1 e VZVP2. As amostras positivas para a presença de cepas virais da família do Herpesviridae serão submetidas a digestão com enzimas de restrição BamHI e BstUI (New England Biolabs® Inc.). A avaliação da mucosa bucal será feita em todas as coletas, pelo mesmo cirurgião-dentista, que fará um exame clínico da mucosa do participante, por meio de observação clínica visual direta, e uma avaliação do grau de mucosite dos pacientes, seguindo os critérios de classificação descritos pela Organização Mundial de Saúde. Para avaliar a associação entre a presença dos vírus da família Herpesviridae e o desenvolvimento da mucosite bucal, será aplicado o teste de Mann-Withney, pertencente à categoria de procedimentos estatísticos não paramétricos ou livres de distribuição, usando-se o programa Biostat 5.3.(AU)