O papel de Coup-TFII na aquisição de destinos celulares durante a diferenciação de células-tronco embrionárias

Resumo

Células-Tronco Embrionárias (CTE) têm ganhado grande destaque em pesquisas que buscam o completo entendimento do início do desenvolvimento embrionário, no desenvolvimento de linhagens celulares específicas e na reprogramação de células somáticas utilizadas em terapia celular para regeneração de tecidos em várias doenças. Estas células apresentam a capacidade de auto-renovação e pluripotência e ensaios de diferenciação celular in vitro a partir de CTE têm sido amplamente utilizados para a compreensão do balanço entre o estado indiferenciado e pluripotente destas células com a determinação de destinos celulares específicos in vitro. O fator de transcrição Coup-TFII (Chicken Ovalbumin Promoter-transcription Factor II) possui um papel fundamental na regulação do desenvolvimento embrionário e na aquisição de destinos específicos, além de estar envolvido em um complexo circuito regulatório que controla a pluripotência das CTE. Visando analizar o possível papel de Coup-TFII na perda da pluripontencia e aquisição de destinos celulares específicos, este trabalho se propõe a superexpressar e silenciar a função destes genes em corpos embrióides derivados a partir de CTE E14-TG2A, seguindo de uma caracterização dos padrões moleculares e morfológicos da diferenciação celular. Para isto, corpos embrióides com expressão normal, aumentada ou reduzida de Coup-TFII serão avaliados quanto à expressão de fatores de pluripotência e de marcadores dos três folhetos germinativos através de marcações por imunohistoquímica e quantificações celulares, por citometria de fluxo, e de transcrição, por PCR quantitativo. (AU)