Estudo in vitro da toxicidade de enzimas proteolíticas de Acanthamoeba spp.

Resumo

Infecções da superfície da córnea por amebas de vida livre do gênero Acanthamoeba, denominadas ceratites amebianas, são caracterizadas pela dor aguda e comprometimento progressivo da acuidade visual do paciente. A adesão dos trofozoítos às células epiteliais da córnea, seguido de lesões e invasão do tecido são processos importantes no estabelecimento da infecção. Os danos causados às células e tecido da córnea pela ameba estão, em geral, associados aos processos de fagocitose e secreção de enzimas. Em estudo recente, nosso grupo de pesquisa demonstrou grande diversidade de perfis proteolíticos associados a diferentes isolados clínicos do protozoário, sugerindo um padrão de virulência específico e diferenciado para cada isolado clínico. No entanto, o efeito patogênico destas proteases em modelos de células da córnea é desconhecido. A partir das hipóteses de que as proteases produzidas por Acanthamoeba spp. podem desempenhar não somente um papel na patogênese da doença e citopatogenicidade das células do epitélio da córnea, mas também podem ser aplicadas como marcadores moleculares na diferenciação dos isolados patogênicos e não-patogênicos, propomos o desenvolvimento deste estudo esperando alcançar os seguintes objetivos: (I) estudar o efeito da quimiotaxia, a partir da interação direta protozoário-hospedeiro, de trofozoítos provenientes de diferentes isolados clínicos de Acanthamoeba spp na viabilidade de células da córnea; (II) avaliar a citopatogenicidade de diferentes perfis de protease de Acanthamoeba spp. em células de córnea; (III) estudar o efeito das proteases de Acanthamoeba spp., a partir da interação indireta protozoário-hospedeiro, nas células da córnea e (IV) avaliar, a nível quantitativo, o efeito dose/ resposta da concentração de proteases de Acanthamoeba spp. na viabilidade de diferentes linhagens celulares de córnea. São esperados resultados que auxiliem no entendimento de diferentes aspectos relacionados à gênese da ceratite amebiana, tais como a virulência diferenciada expressa por isolados clínicos de Acanthamoeba spp. em linhagens celulares de córnea; o efeito direto e indireto de enzimas proteolíticas secretadas pelo protozoário na estrutura e função de células especializadas da córnea e, finalmente, conhecendo o espectro de ação das enzimas secretadas pelo protozoário in vitro, os resultados provenientes deste estudo poderão abrir promissoras perspectivas acerca da elaboração e aplicação de compostos químicos e/ ou biológicos voltados especificamente para atividade inibitória das proteases extracelulares de Acanthamoeba spp., minimizando possíveis efeitos tóxicos sobre as células da córnea.