Inibição temporária da meiose e lipólise química intraoocitária: inovações na produção in vitro de embriões bovinos

Resumo

O uso de fármacos, como cilostamida e forskolin, tem sido efetivo em retardar a meiose por estes serem ativadores da AMPc. O forskolin também é utilizado para diminuir a quantidade de gotas lipídicas presentes no citossol oocitário durante a MIV. Esse projeto possui como objetivo avaliar o efeito do forskolin e da cilostamida como estratégia de atenuação da meiose espontânea e assim melhorar a produção in vitro de embriões bovinos, bem como avaliar a indução da lipólise química durante a MIV de oócitos para melhorar a qualidade e criotolerância dos embriões PIV. No Experimento I, os oócitos serão maturados com forskolin (50 µM) e cilostamida (20 µM), durante 6 h, isolados ou em conjunto para causar uma inibição temporária da retomada da meiose espontânea. Em seguida, serão maturados na ausência desses fármacos durante 18 h para a progressão da meiose e também sob a presença ou não do FSH (1 mg/mL). Após as 24 h de MIV, seus núcleos serão avaliados para saber cada estágio. Os mesmos serão avaliados em relação à produção de embriões (taxa de clivagem, blastocistos e índice de células apoptóticas dos embriões) após a FIV e CIV. No Experimento II, os oócitos serão maturados com o forskolin (50 µM) em três períodos para avaliar a lipólise: 6 h com forskolin e 18 h sem forskolin; 18 h com forskolin e 6 h sem forskolin; e 24 h total com forskolin. Esses mesmos grupos serão avaliados na presença ou ausência de SFB (10 %). Após a maturação, os lipídios serão quantificados com a técnica Nile Red para determinar o grau de lipólise. Na segunda etapa os mesmos grupos serão avaliados após FIV e CIV em relação à produção de embriões (taxa de clivagem e blastocistos), qualidade (índice de apoptose) e também resistência à vitrificação (taxa de reexpansão e índice de apoptose). (AU)