Estudo dos efeitos da metilação catalisada por PRMT7 na função e expressão da proteína ligante de RNA Alba20 em Leishmania major

Resumo

A metilação de arginina é uma modificação pós-traducional encontrada em uma ampla diversidade de eucariotos. As enzimas arginina metiltransferases (PRMTs), que catalisam esta modificação, já foram descritas em parasitos protozoários. Recentemente, o nosso grupo de pesquisa demonstrou o perfil de expressão da enzima PRMT7 de Leishmania major (LmjPRMT7) durante o desenvolvimento de formas promastigotas e o envolvimento dessa proteína na virulência do parasito. Observamos que LmjPRMT7 se associa a nove proteínas ligantes de RNA, sendo uma delas, LmjAlba20, metilada apenas em células que expressam o gene LmjPRMT7. O nocaute deste gene revelou uma dramática alteração no padrão de expressão de LmjAlba20 em parasitos de fase estacionária de crescimento. Neste projeto, propomos investigar o possível mecanismo de regulação exercido pela metilação de arginina sobre a afinidade de LmjAlba20 por transcritos específicos e sobre o padrão de expressão dessa proteína ao longo do desenvolvimento de L. major. Inicialmente, iremos avaliar a atividade de metilação de LmjPRMT7 sobre LmjAlba20 in vitro, utilizando proteínas heterólogas. Nas análises in vivo, serão analisadas amostras de L. major tipo-selvagem e mutantes nulos ”lmjprmt7. Os transcritos associados a myc-LmjAlba20 serão purificados e identificados por sequenciamento de RNA (RNA-seq). Transfectantes com mutações mimetizando a metilação de arginina em LmjAlba20 serão avaliados quanto ao perfil de expressão nos diferentes estágios do parasito. O estudo proposto possibilitará a investigação de um mecanismo de regulação ainda não descrito em tripanossomatídeos.