Efeitos do estresse oxidativo durante a produção "in vitro" de embriões bovinos sobre o miR-199a e genes alvo ERBB2 e ERBB3

Resumo

A produção in vitro de embriões é uma biotecnologia amplamente empregada na pecuária bovina brasileira. Todavia as taxas de sucesso desta técnica são inferiores àquelas obtidas com embriões produzidos in vivo em parte devido à suscetibilidade do embrião a fatores estressantes relacionados ao ambiente in vitro, principalmente ao estresse oxidativo, favorecido pelas altas tensões de oxigênio durante o cultivo embrionário e mediada pela formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) intracelular. Em mamíferos, estudos demonstram que o estresse oxidativo interfere na capacidade do desenvolvimento do embrião através de modificações epigenéticas, como a metilação da fita de DNA, que promove a manutenção dos padrões de expressão gênica. Estas modificações alteram de forma significativa a expressão de reguladores gênicos pós-transcricionais que coordenam diversos mecanismos de crescimento e diferenciação celular, como pequenos RNAs não codificadores, com destaque para o miR-199a. Estudos indicam que em condições de cultivo in vitro o miR-199a tem sua expressão alterada pela metilação do DNA, o que altera, consequentemente os níveis de proteína de seus genes alvo, ERBB2 e ERBB3. As proteínas codificadas por ERBB2 ERBB3, respectivamente ERBB2 e ERBB3, tem sido implicadas no processo de reconhecimento materno-fetal e implantação embrionária. A partir destas observações é possível formular a hipótese que o sistema de produção in vitro levam a alterações nos níveis de ERBB2 e ERBB3 em embriões bovinos, e que esse efeito é mediado por alterações na expressão do miR-199a em resposta ao estresse oxidativo. O presente projeto tem o objetivo de determinar o efeito do estresse oxidativo sobre a expressão do miR-199a durante o desenvolvimento embrionário, e determinar o efeito de alterações do miRNA-199a nos genes alvo e as proteínas ERBB2 e ERBB3. A partir dos resultados deste projeto espera-se elucidar alguns dos efeitos do ambiente in vitro na regulação de vias de sinalização associadas ao estabelecimento da gestação.