Busca avançada
Ano de início
Entree

Métodos LC-MS/2D para triagem de ligantes para a avaliação de atividade inibitória de enzimas e identificação dos compostos ativos em extratos brutos

Processo: 14/11640-3
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de novembro de 2014
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Orgânica
Pesquisador responsável:Carmen Lúcia Cardoso
Beneficiário:Cláudia Seidl
Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:13/01710-1 - Ligantes enzimáticos: novos modelos de triagem, AP.TEM
Bolsa(s) vinculada(s):16/02941-5 - Desenvolvimento e otimização de metodologias bidimensionais de cromatografia líquida acopladas a bioensaios para a descoberta de inibidores enzimáticos em extratos de produtos naturais, BE.EP.PD
Assunto(s):Produtos naturais   Cromatografia de afinidade   Enzimas   Extratos vegetais   Fármacos   Doença de Alzheimer
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Cromatografia de bioafinidade | imobilização de enzimas | inibidores seletivos | métodos de triagem | Produtos Naturais | separações multidimensionais | Produtos Naturais

Resumo

A identificação de substâncias com atividade biológica em extratos naturais ou coleções sintéticas é uma etapa crucial e requer o uso de técnicas rápidas e eficientes de separação e de triagem. Esse paradigma estimula o desenvolvimento de novos métodos de triagem que facilitem e reduzam o tempo empregado na identificação dessas substâncias. Empregando-se técnicas cromatográficas, o isolamento de princípios ativos oriundos de um extrato natural raramente pode ser concretizado em uma única etapa cromatográfica. O emprego de métodos cromatográficos 2D é uma estratégia valiosa para se obter uma maior eficiência na separação com redução do tempo de análise. As separações 2D por cromatografia líquida já são bem estabelecidas e podem ser classificadas em abrangente, pseudo-abrangente e "heart-cutting". No modo abrangente (LCxLC) todo o efluente da primeira dimensão, ou parte representativa dele, é introduzida na segunda dimensão. Essa é a principal diferença quando comparada com a cromatografia liquida heart-cutting (LC-LC) na qual somente frações selecionadas são transferidas para a segunda coluna. Métodos clássicos de fracionamento de extratos naturais bioguiados envolvem alto consumo de tempo, enquanto que triagens off-line não resultam em informações sobre os compostos individuais e muitas vezes apresentam resultados falsos positivos ou falsos negativos. Uma alternativa promissora é o acoplamento das técnicas de separação cromatográfica, principalmente as multidimensionais com os ensaios biológicos, chamados de triagem de alta resolução. Dessa forma, é possível detectar a atividade biológica diretamente no eluente do LC e caracterizar quimicamente o(s) composto(s) biologicamente ativos on line, pelo MS, resultando em redução do tempo e trabalho despendidos na coleta das frações para posterior detecção de atividade. Para a realização dos ensaios biológicos on line, o emprego de enzimas imobilizadas é uma alternativa valiosa. As enzimas imobilizadas possuem maior estabilidade na presença de solventes orgânicos e variações de temperatura, além de permitir a reutilização e o uso de pequenas quantidades de enzima. Nesse contexto, a proposta desse projeto é o desenvolvimento de um método rápido on-line para identificação dos constituintes bioativos de extratos de plantas sem a necessidade de purificação prévia. O extrato é separado na primeira dimensão e as bandas cromatográficas são transferidas para o biorreator, onde a atividade inibitória é avaliada. ICERs (Immobilized capillary enzyme reactors) contendo as enzimas colinesterases acetilcolinesterase (AChE) e a butirilcolinesterase (BChE), foram desenvolvidos em nosso grupo de pesquisa e foram selecionadas como alvos enzimáticos modelo para esse projeto. Essas serinas hidrolases são responsáveis pela catálise da hidrólise do neurotransmissor, acetilcolina, durante as sinapses em terminações nervosas e são alvos de interesse nos estudos de desenvolvimento de fármacos para a Doença de Alzheimer. Além disso, por atuarem na transdução de sinais em animais, há um grande interesse na descoberta de inibidores dessas enzimas para serem utilizados na agricultura como pesticidas e contra insetos sociais. (AU)

Matéria(s) publicada(s) na Agência FAPESP sobre a bolsa:
Matéria(s) publicada(s) em Outras Mídias (0 total):
Mais itensMenos itens
VEICULO: TITULO (DATA)
VEICULO: TITULO (DATA)

Publicações científicas (8)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
LOPES VILELA, ADRIANA FERREIRA; SEIDL, CLAUDIA; LIMA, JULIANA MARIA; CARDOSO, CARMEN LUCIA. An improved immobilized enzyme reactor-mass spectrometry-based label free assay for butyrylcholinesterase ligand screening. Analytical Biochemistry, v. 549, p. 53-57, . (16/02873-0, 14/50299-5, 14/11640-3, 14/06907-0)
SEIDL, CLAUDIA; DE LIMA, JULIANA MARIA; LEME, GABRIEL MAZZI; PIRES, ANANDA FERREIRA; STOLL, DWIGHT R.; CARDOSO, CARMEN LUCIA. A Comprehensive 2D-LC/MS Online Platform for Screening of Acetylcholinesterase Inhibitors. FRONTIERS IN MOLECULAR BIOSCIENCES, v. 9, p. 14-pg., . (14/50249-8, 14/11640-3, 14/06907-0, 19/05363-0, 16/02941-5)
LIMA, JULIANA M.; SEIDL, CLAUDIA; CUNHA, ELISE M. F.; OLIVEIRA, ARTHUR H. C.; CARDOSO, CARMEN L.. On-Flow Ligand Screening Assay Based on Immobilized Nucleoside Diphosphate Kinase B from Homo sapiens. Journal of the Brazilian Chemical Society, v. 30, n. 11, SI, p. 2308-2317, . (14/50249-8, 13/01710-1, 14/06907-0, 14/11640-3)
DE JESUS PRADO, VILMA MENEZES; DE JESUS, RAPHAEL AMANCIO; ANDRADE OLIVEIRA, JULIO MANOEL; BLANK, ARIE FITZGERALD; BEZERRA, DANIEL PEREIRA; PEREIRA SOARES, MILENA BOTELHO; SILVA, VALDENIZIA RODRIGUES; SANTOS, LUCIANO DE SOUZA; CARDOSO, CARMEN LUCIA; LOPES VILELA, ADRIANA FERREIRA; et al. Biological studies and chromatograms aided by chemometric analysis in evaluation of seasonality and extraction method of Croton grewioides extracts. Rev. bras. Bot., v. 45, n. 2, p. 12-pg., . (14/50249-8, 14/11640-3, 13/01710-1)
RAPHAEL A. DE JESUS; VILMA M. J. PRADO; VANDERSON S. PINTO; VALDENIZIA R. SILVA; LUCIANO S. SANTOS; PAULO C. L. NOGUEIRA; SANDRO NAVICKIENE; EDENIR R. PEREIRA-FILHO; ARIE F. BLANK; DANIEL P. BEZERRA; et al. Application of LC-DAD Metabolic Fingerprinting in Combination with PCA for Evaluation of Seasonality and Extraction Method on the Chemical Composition of Accessions from Lippia alba (Mill) N. E. Brown and Biological Activities. Journal of the Brazilian Chemical Society, v. 30, n. 5, p. 978-987, . (14/50299-5, 13/01710-1, 14/11640-3)
DE JESUS, RAPHAEL A.; PRADO, VILMA M. J.; PINTO, VANDERSON S.; SILVA, VALDENIZIA R.; SANTOS, LUCIANO S.; NOGUEIRA, PAULO C. L.; NAVICKIENE, SANDRO; PEREIRA-FILHO, EDENIR R.; BLANK, ARIE E.; BEZERRA, DANIEL P.; et al. Application of LC-DAD Metabolic Fingerprinting in Combination with PCA for Evaluation of Seasonality and Extraction Method on the Chemical Composition of Accessions from Lippia alba (Mill.) N. E. Brown and Biological Activities. Journal of the Brazilian Chemical Society, v. 30, n. 5, p. 978-987, . (13/01710-1, 14/11640-3, 14/50299-5)
VILMA M. J. PRADO; RAPHAEL A. DE JESUS; JULIO M. A. OLIVEIRA; CAMILA S. A. PEREIRA; ARIE F. BLANK; EDENIR R. PEREIRA-FILHO; QUEZIA B. CASS; JULIANA M. DE LIMA; ANTONIO G. FERREIRA; PAULO C. L. NOGUEIRA; et al. Evaluation of the Seasonality and Extraction Method on the Polar Extracts of Croton grewioides Baill. by Chromatogram Fingerprinting and Isolation of a New Triglycosylated Flavonoid. Journal of the Brazilian Chemical Society, v. 32, n. 2, p. 385-394, . (14/50299-5, 14/11640-3, 13/01710-1)
MONTEIRO, AFIF F.; SEIDL, CLAUDIA; SEVERINO, VANESSA G. P.; CARDOSO, CARMEN LUIA; CASTRO-GAMBOA, IAN. Biotransformation of labdane and halimane diterpenoids by two filamentous fungi strains. ROYAL SOCIETY OPEN SCIENCE, v. 4, n. 11, . (14/11640-3, 13/07600-3)

Por favor, reporte erros na lista de publicações científicas utilizando este formulário.