Caracterização do gene Nr2e1 como possível marcador de célula-tronco/progenitora na hipófise de zebrafish (Danio rerio)

Resumo

As células-tronco se caracterizam pela sua capacidade de proliferação, autorrenovação e potencial de diferenciação. Já foram descritas na renovação celular e regulação homeostática da hipófise, porém pouco se sabe sobre o seu perfil de expressão no hipopituitarismo. O gene Nr2e1, conhecido marcador de célula-tronco neuronal durante a embriogênese e presente na vida adulta do cérebro de camundongo, foi encontrado hiperexpresso no período pós-natal e vida adulta na hipófise do camundongo Ames, animal com mutação espontânea no gene Prop1 e que cursa com hipopituitarismo (deficiência de LH/FSH, PRL, TSH e GH). Este projeto se propõe a avaliar o silenciamento do gene Prop1 com morfolino, para mimetizar o aumento da expressão dos marcadores de células-tronco Nr2e1 e Sox2 na hipófise do zebrafish, semelhante ao encontrado no Ames. O objetivo secundário é silenciar o Nr2e1 e avaliar a sua janela de expressão no animal selvagem e mutado, além de avaliar a expressão dos genes envolvidos no ciclo celular Ccnd2 e o P21 (conhecidos alvos do Nr2e1) e os genes que atuam na diferenciação celular hipofisária como o Prop1, Pou1f1 (Pit1) e o Tbx19. O zebrafish foi escolhido devido a sua fácil manutenção, econômicos para criação e com alta taxa reprodutiva. Como não existe camundongo nocaute especifico na hipófise para o Nr2e1 e o camundongo nocaute disponível apresenta agressividade de comportamento, dificuldade de copulação e consequentemente dificuldade de criação de novas linhagens, o zebrafish, surge como um modelo mais apropriado para estudar os marcadores de células-tronco encontrados na hipófise. (AU)