Modulação do estresse oxidativo e do teor de lipídios em oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro: efeitos sobre o potencial de desenvolvimento e criotolerância

Resumo

Uma vez que embriões bovinos produzidos in vitro são mais suscetíveis aos danos oxidativos, a suplementação com antioxidantes nos meios de maturação in vitro (MIV) tem demonstrado resultados satisfatórios sobre o desenvolvimento embrionário. Além do uso de antioxidantes, a adição de inibidores da lipogênese e/ou estimuladores da lipólise também refletem de maneira positiva sobre o desenvolvimento, qualidade e criotolerância embrionária. Visando melhorar a qualidade, o potencial de desenvolvimento e o sucesso da criopreservação de embriões bovinos, o principal objetivo deste estudo é promover modificações em algumas etapas do sistema de produção in vitro para minimizar os danos causados pelo estresse oxidativo e pelo acúmulo de lipídios no citoplasma. Desta forma, os oócitos serão maturados em meio TCM-199 suplementado com 0,6 mM de cisteína associado à 100 ¼M de cisteamina e à 100 UI de catalase (C+C+CAT) ou sem suplementação com antioxidantes (Controle). Posteriormente os oócitos serão submetidos à fecundação in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV), sendo que nesta última etapa serão adicionadas drogas estimuladoras da lipólise/inibidoras da lipogênese ao meio de cultivo. Assim, os zigotos serão cultivados em meio SOF suplementado com 100 ¼M de ácido linoleico conjugado (CLA), ou 2,5 ¼M de Forskolin (FORSK), ou ainda CLA associado ao Forskolin (CLA+FORSK). A clivagem embrionária será avaliada 48 horas pós-inseminação (hpi) e o desenvolvimento embrionário será avaliado 144 e 168 hpi. Os embriões serão avaliados quanto ao conteúdo total de lipídeos, a partir da coloração com Nile Red, e também terão os níveis intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS: H2O2, HO*, ROO*) quantificados, através da coloração com a sonda fluorescente diacetato de 6-carboxi-2',7'-diclorodihidrofluoresceína (H2DCFDA). Os embriões que passarem pelo processo de vitrificação serão aquecidos e cultivados em meio SOF por 24 horas, nas mesmas condições que foram estabelecidas durante o CIV (atmosfera gasosa e antioxidante) e, então, as taxas de re-expansão embrionária (sobrevivência in vitro) e eclosão serão avaliadas às 24 horas de CIV após o reaquecimento.