Identificação do perfil de hidroximetilação do DNA genômico durante a progressão do melanoma

Resumo

As proteínas Tet são dioxigenases dependentes de 2-oxoglutarato (2OG) e Fe(II) que catalisam a hidroxilação de 5-metilcitosina (5mC) em 5-hidroximetilcitosina (5hmC) no DNA, esta podendo agir como um produto intermediário tanto na desmetilação ativa quanto na desmetilação passiva, contribuindo com a dinâmica da metilação do DNA (Koh et al.,2011; Tahiliani et al., 2009). Os padrões de metilação do DNA encontram-se alterados durante a transformação maligna dos melanócitos, afetando sua expressão gênica. Tet1 e Tet2 apresentam diferentes sítios genômicos preferenciais nos quais depositam 5hmC, apontando para funções distintas tanto das proteínas quanto da marca epigenética 5hmC (Huang et al, 2013). Utilizando um modelo linear de progressão do melanoma, com linhagens correspondendo a melanócitos não tumorigênicos (melan-a), melanócitos pré-malignos (4C), células de melanoma não metastático (4C11-) e de melanoma metastático (4C11+), pretendemos realizar o mapeamento completo da 5hmC no genoma destas linhagens e, correlacionando a dados prévios de transcriptoma, caracterizar genes específicos cuja expressão é afetada por esta marca durante a progressão do melanoma. Os genes selecionados serão validados e investigados também em linhagens humanas de melanoma metastático e espécimes tumorais, e linhagens de modelo humano de progressão do melanoma. Os dados de expressão destes genes serão relacionados, quando possível, com dados de expressão gênica e proteica de Tet1 e Tet2. Além disso, serão realizados ensaios funcionais nas linhagens silenciadas para o gene Tet1 ou Tet2, a fim de compreender o papel biológico destas proteínas no melanoma. Este estudo permitirá identificar sítios genômicos específicos contendo 5hmC e caracterizar genes alterados epigeneticamente durante a progressão do melanoma. (AU)