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Origens da replicação em tripanossomas

Processo: 14/13375-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2014
Vigência (Término): 30 de junho de 2018
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
Pesquisador responsável:Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
Beneficiário:Christiane Bezerra de Araujo
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular, AP.CEPID
Assunto(s):Trypanosoma cruzi   Nucleossomos
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Nucleossomos | Origens replicação | Replicação DNA | Trypanosoma brucei | Trypanosoma cruzi | Origens da replicação em tripanossomas

Resumo

ORIGENS DA REPLICAÇÃO EM TRIPANOSSOMAS 1(1-2) Origens de replic. em tripanossomas e sua posição em nucleossomos durante o ciclo de vida de T.cruzi. Replic. cromossômica inicia com a montagem do complexo de pré-replic.(pré-RC)em sítios de DNA ao longo dos cromossomos, q são chamados de origens de replicação1. Os genomas da maioria das células eucarióticas são replicados a partir de muitas origens de replic. durante a fase de síntese do S do ciclo celular. Este proc. requer que as células devam garantir que 1 nº suficiente de origens são usados em cada fase S, s/a reutilização de qualquer origem em 1 único ciclo celular. Ao contrário de outros eucariotos, pouco se sabe sobre o processo de replic. do DNA em tripanossomas, protozoários parasitas q aparecem no início da evolução. Este projeto pretende identificar origens de replic. em T.cruzi e T.brucei, agentes etiológicos de Chagas e Doença do Sono,respectiva/e. Algumas seqüências obtidas serão verificadas como origens de replic. de fato usando ensaios de SMARD e ChIP.2(3-4) Origens de replic. em tripanossomas e sua posição em nucleossomos durante o ciclo de vida de T.cruzi. O ciclo de vida do T.cruzi alterna em estágios ñ-replicativos e replicativos. Bases moleculares q controlam a falta de replic. de DNA na fase ñ-replicativa ainda ñ foram determinadas. Já se mostrou q em eucariotos as origens de replic. estão localizadas em regiões ñ-nucleossomais. Identificadas as origens de replic. em T.cruzi, investigaremos como essas seqüências são organizadas,relativas à posição nucleosomal, em estágios do ciclo de vida de T.cruzi. Desta forma,os DNAs genômicos serão digeridos com nuclease de Micrococcus, q digere todos os DNA livres nucleossomais,e o DNA protegido nucleossomal será sequenciado.3(5):Maquinário de pré-replic.de tripanossomas de DNA. Replic.cromossômica se inicia com a montagem do complexo de pré-replic.(pré-RC)em sítios de DNA ao longo dos cromossomos, chamados de origens de replication1. Em eucariotos,o pré-RC é composto por 1 complexo de reconhecimento de origem(ORC),contendo as moléculas Orc1-Orc6,2 proteínas denominadas Cdc6eCDT1, e a manutenção do complexo de mini-cromossomo(MCM), o qual é composto de moléculas de Mcm2-MCM7. Eqto. o pré-RC composto de ORC1-6, Cdc6, CDT1 e MCM2-7 é organizado na cromatina, origens passa a estar apta para replicar. Além disso, outras proteínas devem associar-se com a origem antes da iniciação bem sucedida de síntese de DNA. A ligação de fatores de regulação e os componentes da forquilha de replic. do DNA permite o desenrolamento da origem, o recrutamento de polimerases de DNA replicativa e, por fim,o estabelecimento da forquilha de replic.2, 3. Ao contrário de outros eucariotos, pouco se sabe sobre o processo de replic. do DNA em tripanossomas, parasitas protozoários q aparecem no início da evolução. Como os tripanossomatídeos têm características peculiares, com seus genes transcritos em unidades policistrônicas e processados por 1 reação de trans-splicing e com expressão gênica controlada principal/e a nível pós-transcricional4-6, a hipótese é de q novas estratégias para lidar com a regulação da replic. podem ser encontradas nesses organismos. Bancos de dados genômicos de tripanossomatídeos mostram q estes organismos contêm todas as moléculas MCM, mas ñ contêm sequências em seu genoma q poderiam codificar para as subunidades ORC,Cdc6 ou CDT1. Tripanossomas têm 1 gene para apenas 1 das 6 subunidades do ORC,Orc1, q é tbém homólogo a Cdc6. Ele é anotado como Orc1 7 e o nomeamos Orc1/Cdc6. Resultados anteriores do nosso grupo mostraram q Orc1/Cdc6 é de fato 1 componente de maquinário de pré-replic. q poderia estar envolvido na seleção das origens de replic. nestes organismos8. Usando técnicas inversas genéticas (RNAi, expressão de proteínas de tag),e ensaios moleculares e celulares convencionais, pretendemos (i) buscar moléculas q podem ser componentes do maquinário de pré-replic. e/ou (ii) compreender como é o recrutamento de complexo helicase MCM direta/e pelo Orc1/Cdc6.

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Publicações científicas (7)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
PAVANI, RAPHAEL SOUZA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; HENRIQUE FERNANDES, CARLOS ALEXANDRE; MORINI, FLAVIA SOUZA; ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; DE MATTOS FONTES, MARCOS ROBERTO; SANT'ANNA, OSVALDO AUGUSTO; MACHADO, CARLOS RENATO; CANO, MARIA ISABEL; FRAGOSO, STENIO PERDIGAO; et al. Replication Protein A Presents Canonical Functions and Is Also Involved in the Differentiation Capacity of Trypanosoma cruzi. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 10, n. 12, . (14/13375-5, 14/24170-5, 13/17864-8, 14/02978-0, 13/07467-1, 15/10580-0)
DE LIMA, LOYZE P.; CALDERANO, SIMONE G.; DA SILVA, MARCELO S.; DE ARAUJO, CHRISTIANE B.; VASCONCELOS, ELTON J. R.; IWAI, LEO K.; PEREIRA, CLAUDIO A.; FRAGOSO, STENIO P.; CAROLINA ELIAS, M.. Ortholog of the polymerase theta helicase domain modulates DNA replication in Trypanosoma cruzi. SCIENTIFIC REPORTS, v. 9, . (16/50050-2, 14/13375-5, 13/07467-1, 14/24170-5)
DE ARAUJO, CHRISTIANE B.; CALDERANO, SIMONE G.; ELIAS, MARIA CAROLINA. The Dynamics of Replication in Trypanosoma cruzi Parasites by Single-Molecule Analysis. Journal of Eukaryotic Microbiology, v. 66, n. 3, p. 514-518, . (13/07467-1, 16/50050-2, 14/13375-5)
DA SILVA, MARCELO S.; CAYRES-SILVA, GUSTAVO R.; VITARELLI, MARCELA O.; MARIN, PAULA A.; HIRAIWA, PRISCILA M.; ARAUJO, CHRISTIANE B.; SCHOLL, BRUNO B.; AVILA, ANDREA R.; MCCULLOCH, RICHARD; REIS, MARCELO S.; et al. Transcription activity contributes to the firing of non-constitutive origins in African trypanosomes helping to maintain robustness in S-phase duration. SCIENTIFIC REPORTS, v. 9, . (15/10580-0, 17/07693-2, 17/18719-2, 16/17775-3, 14/24170-5, 16/50050-2, 13/07467-1, 14/13375-5)
MARIN, PAULA ANDREA; OBONAGA, RICARDO; PAVANI, RAPHAEL SOUZA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; DE ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; LIMA, ANDRE ARRUDA; AVILA, CARLA CRISTI; CESTARI, IGOR; MACHADO, CARLOS RENATO; ELIAS, MARIA CAROLINA. ATR Kinase Is a Crucial Player Mediating the DNA Damage Response in Trypanosoma brucei. FRONTIERS IN CELL AND DEVELOPMENTAL BIOLOGY, v. 8, . (17/18719-2, 18/12364-0, 15/10580-0, 14/02978-0, 14/24170-5, 19/01895-8, 16/50050-2, 14/13375-5)
DE ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; CHAGAS DA CUNHA, JULIA PINHEIRO; INADA, DAVI TOSHIO; DAMASCENO, JEZIEL; JERONIMO LIMA, ALEX RANIERI; HIRAIWA, PRISCILA; MARQUES, CATARINA; GONCALVES, EVONNILDO; NISHIYAMA-JUNIOR, MILTON YUTAKA; MCCULLOCH, RICHARD; et al. Replication origin location might contribute to genetic variability in Trypanosoma cruzi. BMC Genomics, v. 21, n. 1, . (13/07467-1, 14/24170-5, 16/50050-2, 14/13375-5)
DE ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; DE LIMA, LOYZE PAOLA; CALDERANO, SIMONE GUEDES; DAMASCENO, FLAVIA SILVA; SILBER, ARIEL M.; ELIAS, MARIA CAROLINA. Pep5, a Fragment of Cyclin D2, Shows Antiparasitic Effects in Different Stages of the Trypanosoma cruzi Life Cycle and Blocks Parasite Infectivity. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, v. 63, n. 5, . (16/50050-2, 14/13375-5, 16/06034-2, 13/07467-1, 17/16553-0)

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