Investigação da funcionalidade de haplótipos no gene interleucina 4

Resumo

A Doença Periodontal (DP) tem caráter multifatorial, com influência de fatores como a presença de microrganismos periodontopatogênicos, suscetibilidade genética do hospedeiro, reação do sistema imune, hábito de fumar, stress e presença de doenças sistêmicas. O tecido periodontal inflamado produz várias citocinas, dentre elas a interleucina 4 (IL-4). Estudos realizados por este grupo investigaram polimorfismos nos genes IL4 em 500 pacientes com e sem periodontite, onde foram identificados indivíduos com suscetibilidade genética à periodontite. Referente ao gene IL4, indivíduos carregando o haplótipo TCI/CCI formado pelos polimorfismos -590(T/C), +33(T/C) e VNTR(I/D), são 5 vezes mais suscetíveis à DP (OddsRatioajustado= 5,3; 95% Intervalo Confiança = 2,2 -12,9), enquanto o haplótipo TTD/CTI conferiu proteção contra a DP, OddsRatioajustado= 0,18 (95% Intervalo Confiança = 0,04 - 0,88). Recentemente, investigou-se se esses haplótipos influenciariam os níveis de periodontopatógenos, a produção das citocinas IL-4 e a resposta ao tratamento periodontal, comparando os resultados entre pacientes que carregavam os diferentes haplótipos. Os resultados sugeriram que indivíduos classificados como geneticamente suscetíveis à periodontite por carregarem determinados haplótipo no gene IL4 (TCI/CCI), demonstraram que indivíduos carregando esse haplótipo tiveram maiores níveis de P.gingivalis, T. forsythia, T. denticola quando comparados com pacientes geneticamente protegidos contra a DP (haplótipo TTD/CTI). No entanto, ainda não se sabe como os haplótipos poderiam ter influenciado a expressão gênica e/ou a quantidade de periodontopatógenos. Portanto, é necessário realizar estudos in vitro, com condições mais controladas, para verificar a real funcionalidade dos haplótipos no gene IL4. Assim, o objetivo do presente projeto é: a partir de células coletadas do sangue periférico de pacientes com diferentes haplótipos do gene IL4 investigar possíveis diferenças na resposta imune inata e adaptativa. Após confirmação por sequenciamento do haplótipo no gene IL4 de cada paciente, será coletado sangue periférico para avaliar a influência de cada polimorfismo/haplótipo na resposta a antígenos pela determinação da expressão gênica de IL-4 (mRNA), proteínas secretadas (Multiplex) e proteínas intracelulares, e para caracterização do perfil fenotípico celular. Além disso, propõe-se incluir o objetivo 2: Investigar a funcionalidade das variações genéticas na modulação da expressão de IL-4 por meio de plasmídeos recombinantes construídos artificialmente. Estudos utilizando gene-repórter. Assim, pretendemos comparar a resposta da possível influência dos diferentes haplótipos entre aquela obtida dos tipos celulares dos pacientes (objetivo 1) da resposta obtida por meio da inserção dos constructos na linhagem NIH3T3 (objetivo 2). (AU)