Expressão de genes das vias anabólicas e catabólicas e de microRNAs no músculo esquelético do Pacu (Piaractus mesopotamicus) durante período de jejum e realimentação

Resumo

O músculo esquelético nos peixes corresponde a maior parte da massa corporal, e o crescimento ocorre por hipertrofia e/ou hiperplasia das fibras, processos que variam com a espécie, fase de desenvolvimento e estado nutricional. O desenvolvimento, crescimento e o fenótipo muscular envolve a ativação ou inibição de vias de sinalização, responsáveis pelo controle da atividade das vias catabólicas e anabólicas do tecido muscular. Com base nessas informações, estudos que buscam elucidar as vias de sinalização e os mecanismos celulares e moleculares envolvidos com o controle da massa muscular são fundamentais para um melhor esclarecimento sobre a real contribuição dessas vias no crescimento muscular, em condições que ocorre uma alteração na homeostase entre os estados catabólico e anabólico, como em situações de restrição alimentar e realimentação. O objetivo desse trabalho é avaliar na musculatura de juvenis de pacu (300g) submetidos a um período de jejum (10 dias) e realimentação de 05 dias: (a): a morfologia e a morfometria das fibras musculares; (b) a expressão gênica de componentes das vias do catabolismo (Foxo - MuRF - MAFbx) e anabolismo (IGF - PI3K - AKT - mTOR) e dos fatores transcricionais da família MyoD (MyoD, MyF5, miogenina e MRF4); (c) o perfil de expressão dos MicroRNAs músculo específicos (miR-1, miR-133a, miR-133b, miR-206 e miR-499) e seus genes alvo mais expressos, in vivo e (d) os MicroRNAs diferencialmente expressos e os genes alvo após o silenciamento dessas pequenas moléculas, em cultura primária de mioblastos. Os peixes serão cultivados em caixas d'agua de 0,5 m³ dotadas de sistemas de recirculação distintas. Amostras de músculo vermelho e branco serão retiradas (n=10), a cada 2 dias de jejum e 6 horas de realimentação. Tanto nos experimentos in vivo quanto in vitro, a expressão dos genes selecionados e dos microRNAs será realizada por Reação em Cadeia da Polimerase após Transcrição Reversa em Tempo Real (RT-qPCR). O silenciamento dos microRNAs mais expressos in vivo nos músculos vermelho e branco durante o período de jejum, será realizado, in vitro, utilizando-se oligonucleotídeos antisense inibidores. Os dados obtidos serão submetidos a análises estatísticas adequadas após a realização dos testes de normalidade e homocedasticidade.